Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:27 min. • July 8th, 2025
Comece com um mouse em movimento livre com uma cânula de fibra óptica implantada.
Conecte uma extremidade de um patch cord de fibra óptica à cânula e a outra extremidade a uma fonte de luz de excitação.
O camundongo expressa um indicador de cálcio geneticamente codificado marcado com fluoróforo verde, ou GECI, na área hipotalâmica lateral, ou neurônios LHA.
A fibra óptica implantada entra em contato com a região da habênula lateral, ou LHb, onde terminam os axônios LHA.
Excite o GECI em seu comprimento de onda de excitação ideal e registre o sinal de linha de base.
Agora, aplique repetidas baforadas de ar no mouse para evocar uma resposta aversiva ao estresse.
Este estímulo desencadeia potenciais de ação nos terminais do axônio LHA, abrindo canais de cálcio dependentes de voltagem e permitindo o influxo de cálcio.
Os íons de cálcio intracelulares se ligam ao GECI, induzindo uma mudança conformacional que aumenta a emissão de fluorescência verde.
Visualize o sinal óptico.
O aumento da fluorescência em resposta a sopros de ar no camundongo confirma o papel da via LHA-LHb na transmissão de sinais aversivos.
Comece inspecionando a extremidade distal das fibras do patch cord a olho nu e com um mini microscópio de fibra. Se a superfície das fibras estiver arranhada, polir novamente as fibras usando filme de polimento de fibra com grão fino. Em seguida, limpe as extremidades distais do patch cord com etanol 70% e um aplicador de algodão. Limpe as cânulas de fibra óptica usando etanol 70% e um aplicador de algodão.
Conecte a extremidade da ponteira do patch cord à fibra implantada usando uma luva dividida de cerâmica coberta com um tubo retrátil preto. Durante a conexão, certifique-se de que a manga esteja apertada. Deixe o animal se recuperar por alguns minutos, então, comece a gravar o sinal óptico e execute o experimento. Durante a gravação, fique de olho no traço ao vivo para garantir gravações de qualidade e observe se há saltos no sinal indicando que a capa não está apertada o suficiente.