Registro do potencial de campo local em fatias do córtex hipocampal-entorrinal de camundongos

Prenda uma fatia do córtex hipocampal-entorrinal do camundongo em uma câmara de gravação submersa.

Flua continuamente ACSF oxigenado a uma temperatura constante para manter a viabilidade do tecido.

Posicione uma pipeta de estimulação cheia de uma solução eletrolítica dentro do estrato radiado da região CA3 do hipocampo, contendo neurônios que recebem informações do córtex entorrinal.

Insira uma pipeta de registro preenchida com ACSF no estrato piramidal da região CA1, consistindo de neurônios que formam sinapses com projeções axonais do CA3.

Usando a pipeta de estimulação, aplique um pulso elétrico para desencadear potenciais de ação nos neurônios CA3 pré-sinápticos.

O potencial de ação induz a liberação de neurotransmissores, que se ligam a receptores nos neurônios CA1 pós-sinápticos. A ligação induz o influxo de íons, levando a uma mudança no potencial de membrana.

As mudanças combinadas no potencial de membrana de vários neurônios CA1 pós-sinápticos, denominados potencial de campo local ou LFP, são registradas extracelularmente pela pipeta de registro.

Para registrar os potenciais de campo locais, encha um béquer de 400 mililitros com ACSF borbulhado com carbógeno e coloque uma extremidade do tubo da bomba no béquer. Ligue uma bomba peristáltica de oito a 10 mililitros por minuto, para direcionar o ACSF do copo de 400 mililitros para um reservatório aquecido e do reservatório para a câmara de registro a 32 graus Celsius.

Em seguida, prenda brevemente a tubulação e desligue a bomba para pausar o fluxo. Usando uma pinça fina, transfira uma fatia de tecido cerebral para a câmara de gravação pelo canto do papel da lente em que o tecido está apoiado, corte. Retire o papel da lente, deixando a fatia submersa na câmara de gravação, e use uma harpa para prender a fatia.

Usando um micromanipulador manual, avance lentamente a ponta de uma pipeta de estimulação cheia de cloreto de sódio na superfície da fatia em um ângulo de 30 a 45 graus. Em seguida, use um segundo micromanipulador para avançar lentamente a ponta de uma pipeta de potencial de campo local preenchida com ACSF para a região de interesse em um ângulo de 30 a 45 graus e registre o potencial de campo local da amostra de acordo com os protocolos padrão.