Registro combinado de saída aferente mecanicamente estimulada e marcação de terminais nervosos em folículos pilosos de camundongos

Comece com um pavilhão auricular de rato dissecado, ou ouvido externo, com os nervos conectados expostos.

Insira o nervo destinado ao registro no eletrodo de registro.

Remova a camada de gordura perto da margem do pavilhão auricular para expor a base do folículo piloso e, em seguida, dobre a pele para expor os pelos para estimulação.

Posicione uma sonda de estimulação mecânica para tocar e desviar os cabelos.

Essa estimulação ativa as terminações nervosas sensoriais, abre canais iônicos controlados mecanicamente, permite o influxo de íons positivos e gera potenciais de ação.

Os potenciais de ação se propagam através dessas terminações para o nervo que está sendo registrado. Visualize o sinal.

Em seguida, adicione uma tintura fluorescente e continue a estimulação do cabelo.

O corante se liga às membranas neuronais estimuladas e é internalizado via endocitose sem afetar a atividade neuronal.

Pós-estimulação, lave para remover o corante não ligado.

Adicione um agente sequestrante para remover o corante ligado à membrana não internalizado.

Usando microscopia de fluorescência, visualize a coloração nos folículos pilosos para identificar terminações nervosas estimuladas mecanicamente.

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