Registro do potencial de campo local de ambos os hemisférios do cérebro do camundongo

Comece com um camundongo anestesiado com a cabeça presa em uma estrutura estereotáxica.

Raspe e esterilize o couro cabeludo.

Faça uma incisão e remova o tecido residual para expor o crânio.

Limpe o crânio com um desinfetante e faça furos nos locais de destino.

Remova a camada externa do cérebro.

Insira microeletrodos preenchidos com uma solução iônica nos orifícios em um ângulo desejado.

Abaixe os dois microeletrodos nas coordenadas-alvo do cérebro.

Teste a resistência dos eletrodos e ajuste as configurações de gravação para garantir a aquisição confiável de dados de potencial de campo local ou LFP.

LFP reflete mudanças de voltagem resultantes da atividade coletiva de muitos neurônios dentro de uma pequena região.

Registre LFPs de ambos os hemisférios para comparar a atividade neural entre eles.

Antes da cirurgia, confirme a profundidade da anestesia do camundongo realizando uma pinça da cauda ou do dedo do pé com uma pinça. Em seguida, posicione o mouse em um aparelho estereotáxico e fixe sua cabeça. Aplique pomada em ambos os olhos para mantê-los úmidos.

Em seguida, raspe a cabeça e esterilize a área. Faça uma pequena incisão de 12 a 15 milímetros no meio da área raspada. Usando uma pinça, puxe suavemente o couro cabeludo para longe da linha média. Depois, separe a pele suavemente e remova o tecido residual.

Limpe o crânio usando cotonetes revestidos de peróxido de hidrogênio. Sob um estereomicroscópio, faça dois pequenos orifícios de raios de 1 a 1,5 milímetro nos lados esquerdo e direito do crânio para permitir a inserção dos microeletrodos de registro nas regiões M2.

Com cuidado, remova a dura-máter com uma agulha de tungstênio e, em seguida, insira dois microeletrodos de registro separados preenchidos com cloreto de sódio 0,5 molar nos orifícios em um ângulo de 60 graus usando micromanipuladores mecânicos.

Para gravação LFP, abaixe lentamente os eletrodos de vidro esquerdo e direito até as coordenadas M2. Para controle de qualidade, teste a resistência de cada eletrodo usando o amplificador diferencial. Em seguida, defina o processo de gravação em passa-alta de 0,1 Hertz e passa-baixa de 1.000 Hertz com amplificação de 1.000 vezes. Colete os dados brutos digitalizados do LFP em estado estável por pelo menos 60 segundos, com o mouse respirando uniformemente a duas respirações por segundo sob anestesia.