Analisando o comportamento do sono em camundongos por meio de eletroencefalograma e gravações de eletromiograma

Prenda um mouse anestesiado em uma estrutura estereotáxica.

Desinfete a pele raspada, cubra o mouse com uma cortina e faça uma incisão na linha média para expor o crânio.

Faça dois furos no crânio em coordenadas estereotáxicas específicas.

Prepare uma unidade de eletrodo de gravação com um conector de quatro pinos conectado a fios de aço inoxidável.

Use dois fios com parafusos como eletroencefalograma ou eletrodos de EEG para medir a atividade elétrica cerebral.

Use os outros dois fios como eletromiograma ou eletrodos EMG para medir a atividade elétrica muscular.

Aparafuse os eletrodos de EEG nos orifícios e fixe o conjunto do eletrodo no crânio.

Insira os eletrodos EMG nos músculos do pescoço.

Feche a incisão com suturas e permita que o camundongo se recupere.

Transfira o mouse para uma câmara de gravação à prova de som.

Conecte o conjunto do eletrodo a um cabo de gravação e conecte-o a um amplificador.

Registre os sinais de EEG e EMG para analisar diferentes estágios do sono e vigília em camundongos.

Antes de começar, esterilize todas as ferramentas cirúrgicas em um esterilizador de esferas quentes. Assim que o mouse for confirmado como anestesiado por uma pitada no dedo do pé, raspe o cabelo da cabeça e do pescoço.

Em seguida, prenda o mouse ao quadro estereotáxico e fixe a cabeça entre as duas barras auriculares. Em seguida, aplique pomada oftálmica nos olhos para evitar o ressecamento. Prossiga com a limpeza da pele raspada com álcool e esfoliantes à base de iodo.

Em seguida, corte ao longo da linha média com um bisturi para expor o crânio e prenda a pele ao lado usando clipes para manter a área cirúrgica aberta. Usando um cortador de metal duro com uma broca de 0,8 milímetro, faça dois furos. Faça um orifício sobre a área cortical frontal. Coloque o segundo orifício sobre a área parietal do hemisfério direito.

Em seguida, usando uma chave de fenda de joalheiro, aparafuse os parafusos de gravação de EEG de aço inoxidável nos orifícios. Insira os parafusos com apenas duas a duas voltas e meia para obter o posicionamento epidural sobre o córtex. Os parafusos não devem mexer depois de inseridos. Isso é muito importante.

Agora, fixe o conjunto do eletrodo com os pinos para cima no crânio. Os eletrodos devem ser fixados diretamente. Use um cotonete para ajudar a garantir a posição dos eletrodos e cole o eletrodo usando cianoacrilato, seguido de cimento dentário.

Em seguida, faça pequenos orifícios no trapézio e insira o eletrodo EMG nesses orifícios. Em seguida, suturar a pele com fio de seda de 0,1 milímetro de diâmetro. Agora remova o mouse do quadro estereotáxico e coloque-o em uma almofada térmica.

Dê ao camundongo injeções intraperitoneais de ampicilina e meloxicam e monitore o camundongo até que ele recupere a decúbito esternal. Em seguida, abrigue o mouse sozinho.

Uma semana após o implante dos eletrodos, transfira o camundongo para uma gaiola experimental em uma câmara de gravação à prova de som. Prenda o conjunto do eletrodo EEG/EMG no mouse a um cabo de gravação conectado a um anel coletor.

Conecte o cabo conversor AD a um filtro de sinal EEG/EMG amplifier conectado ao anel coletor. Use um conversor AD para converter o sinal em um sinal digital de 128 hertz e, finalmente, grave o sinal em um computador.

Habitue o mouse por dois a três dias na câmara de gravação. Inicie o software de gravação de EEG/EMG. Para começar, clique na guia de informações do arquivo de dados e clique na caixa ao lado do nome do arquivo. Insira um nome de arquivo e clique em Salvar. Em seguida, na guia de condição de gravação, selecione todos os canais EEG/EMG que precisam ser gravados. Além disso, selecione a frequência de amostragem nesta guia.

Agora, na guia de informações do canal, verifique se os canais selecionados são exibidos corretamente. Uma vez confirmado, inicie o registro selecionando primeiro a guia de configuração do cronômetro. Em seguida, clique em Monitor para exibir EEG e EMG. Se os sinais forem exibidos corretamente, defina a hora do relógio para o início e o fim da gravação na área principal do temporizador. Em seguida, clique no botão do monitor para iniciar a gravação.