Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:23 min. • July 8th, 2025
Assuma o controle e as larvas transgênicas da mosca da fruta Drosophila.
As larvas transgênicas expressam um canal iônico sensível à luz nos neurônios receptores olfativos ou ORNs. Esses neurônios fazem parte do circuito olfativo, que detecta estímulos de odor e transmite sinais ao cérebro, guiando o movimento larval em resposta aos estímulos.
Coloque as larvas em um prato com agarose solidificada dentro de uma arena comportamental e cubra o prato.
Exponha as larvas a um comprimento de onda de luz que estimule os canais iônicos e registre o comportamento de navegação das larvas.
A luz ativa o all-trans-retinal, um cromóforo, que induz a abertura de canais iônicos, conhecida como estimulação optogenética, e permite o influxo de cátions.
O influxo gera potenciais de ação que transmitem sinais ao longo do circuito olfativo, impactando o comportamento de navegação larval
.As larvas transgênicas com canais iônicos sensíveis à luz exibem uma mudança na distância percorrida em linha reta antes de mudar de direção, conhecida como comprimento de corrida, em comparação com as larvas de controle.
Para o ensaio de comportamento, mantenha uma temperatura e umidade consistentes na sala de comportamento. Prepare o meio rastejante larval despejando 150 mililitros de agarose a 1,5% derretida em uma placa de Petri quadrada de 22 centímetros por 22 centímetros
.Deixe a agarose solidificar e esfriar por 1 a 2 horas nas placas de Petri, antes de usá-las no ensaio de comportamento. Depois que a agarose solidificar, transfira não mais do que 20 das larvas de terceiro ínstar preparadas para o centro da placa de Petri e cubra a placa de Petri com a tampa.
Coloque a placa de Petri na arena de comportamento sob a câmera CCD. Ligue a fonte de luz LED infravermelha de 850 nanômetros para visualizar as larvas no vídeo. Inicie a câmera CCD para registrar o movimento larval. Por fim, passe para o processamento e análise de dados.