JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 3:20 min • July 8th, 2025
Comece com uma configuração de eletrofisiologia contendo um segmento de cólon de camundongo imobilizado em uma solução eletrolítica balanceada.
O cólon tem um gânglio pélvico principal exposto com um ramo nervoso sensorial aferente pré-dissecado que transmite sinais do cólon para o cérebro.
O cólon é canulado em ambas as extremidades com válvulas de três vias para infusão de solução salina.
Encha o eletrodo de registro e posicione-o próximo ao nervo aferente.
Aplique uma leve sucção para puxar o nervo para dentro do eletrodo, formando uma vedação firme.
Monitore o sinal elétrico do nervo basal e a pressão interna do cólon.
Feche a torneira da cânula de saída enquanto infunde continuamente a solução salina no cólon.
Isso causa um aumento gradual da pressão dentro do cólon, resultando em distensão do cólon e estimulando o nervo aferente.
Grave novamente o sinal nervoso e a pressão do cólon.
Um aumento gradual no sinal nervoso com o aumento da pressão confirma a estimulação nervosa aferente.
Inspecione uma pipeta de vidro pré-puxada sob o microscópio de dissecação. Quebre a ponta do eletrodo com um par de pinças, de modo que seja de tamanho compatível com o diâmetro do nervo a ser registrado. Em seguida, chanfre a ponta colocando-a perto de um alargamento mais leve.
Indivíduos novos nessa metodologia também podem achar complicado chanfrar a ponta do eletrodo compatível com o tamanho do nervo.
Em seguida, coloque o eletrodo chanfrado no suporte do eletrodo. Em seguida, conecte uma seringa de 10 mililitros à porta lateral do suporte para a aplicação de pressão negativa ou positiva no eletrodo. Depois disso, conecte o suporte ao estágio principal do bioamplifier e monte o estágio principal em um manipulador.
Em seguida, mova o eletrodo para o banho de tecido e encha o eletrodo com a solução de Krebs aplicando uma sucção suave, até que entre em contato com o fio de prata do suporte. Em seguida, coloque a ponta do eletrodo perto da extremidade cortada do nervo e aplique pressão negativa para sugar o nervo para dentro do eletrodo. Em seguida, aplique mais pressão negativa para que cerca de 1 milímetro do nervo seja puxado para dentro do eletrodo e forme uma vedação hermética.
Agora, ligue o bioamplificador e defina o filtro para 300 a 3.000 hertz. Monitore o sinal no osciloscópio e registre o sinal nervoso e o sinal de pressão intraluminal no software de processamento Spike Data. Em seguida, aplique a distensão em rampa do cólon fechando a torneira de três vias na cânula de saída enquanto infunde continuamente intraluminalmente. Monitore a pressão intraluminal até atingir 60 milímetros de mercúrio.