Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:50 min. • July 8th, 2025
Comece com uma câmara de gravação contendo um segmento dissecado de um jejuno de camundongo, uma parte do intestino delgado, submerso em uma solução eletrolítica e preso com um pino.
O segmento jejunal inclui o tecido adiposo circundante com um nervo aferente mesentérico pré-dissecado, que transmite sinais do jejuno para o cérebro.
O segmento é conectado às portas de entrada e saída da câmara para o fluxo da solução.
Pegue um eletrodo de sucção conectado a um micromanipulador e uma unidade de gravação.
Encha o eletrodo de sucção com a solução eletrolítica e posicione-o próximo ao nervo aferente mesentérico.
Aplique uma sucção suave para puxar o nervo com o tecido adiposo circundante para formar uma vedação firme.
Feche a porta de saída enquanto mantém o fluxo de entrada para aumentar gradualmente a pressão interna e a distensão do segmento jejunal.
Isso causa a excitação do nervo aferente mesentérico ao redor do jejuno, gerando um sinal elétrico.
Registre a atividade nervosa aferente em resposta às mudanças na pressão jejunal.
Neste procedimento, usando um micromanipulador, abaixe a ponta do eletrodo de sucção no banho do órgão. Em seguida, aspire suavemente um pouco de solução de Krebs do banho de órgão para que a ponta do eletrodo fique submersa na solução de Krebs. Certifique-se de que a solução Krebs cubra o eletrodo de fio dentro do eletrodo de sucção.
Em seguida, posicione a ponta do eletrodo de sucção imediatamente ao lado da fita nervosa aferente seccionada e puxe a fita nervosa seccionada para o capilar em todo o seu comprimento. Manobre a ponta do eletrodo em direção ao tecido adiposo e aspire-o para o capilar de vidro com o êmbolo, selando mecanicamente o nervo no capilar do conteúdo do banho do órgão.
Para verificar o registro da atividade nervosa aferente, realize um aumento induzido pela distensão da rampa no disparo aferente fechando a porta de saída para levar a um aumento gradual da pressão no segmento intestinal. Execute o protocolo experimental desejado somente quando três distensões consecutivas da rampa produzirem uma descarga reprodutível de várias unidades.