Implantação de um conjunto de eletrodos em um cérebro de camundongo para registro eletrofisiológico

Prenda um mouse anestesiado em uma estrutura estereotáxica contendo uma almofada de aquecimento para manter a temperatura corporal.

Aplique lubrificante para evitar que os olhos sequem e injete uma solução eletrolítica por via subcutânea para manter a hidratação.

Remova o pelo do couro cabeludo, desinfete a área e injete um analgésico por via subcutânea para reduzir a dor.

Faça uma incisão para expor o crânio e, em seguida, limpe-o para tornar visíveis os pontos anatômicos para identificar as regiões do cérebro.

Aplique adesivo dental e endureça-o usando uma luz de polimerização para auxiliar no implante do eletrodo.

Faça furos acima do hipocampo e do cerebelo e monte um conjunto de eletrodos usando um suporte na estrutura estereotáxica.

Os eletrodos bipolares registram a atividade do hipocampo, enquanto um eletrodo de referência obtém a atividade basal do cerebelo.

Insira os eletrodos, prenda o conjunto com cimento dental e solte do suporte.

Administre novamente a solução eletrolítica e um analgésico.

Permita que o mouse se recupere completamente antes de realizar o registro eletrofisiológico.

Antes de prosseguir com a cirurgia, registre o peso dos camundongos VGAT-Cre de 8 semanas. Em seguida, coloque o animal em uma câmara de indução para induzir a anestesia. Coloque o mouse anestesiado em uma almofada de aquecimento a 37 graus Celsius. Se estiver usando um sistema de temperatura controlado por feedback, insira a sonda de temperatura no reto do animal para monitoramento de temperatura durante a cirurgia. Para iniciar a cirurgia, redirecione o fluxo de anestesia inalante para o cone do nariz e monte o animal na estrutura estereotáxica, colocando suavemente os dentes superiores da frente na barra incisiva e mova o cone para o nariz, em seguida, coloque as barras auriculares nas orelhas e fixe na estrutura estereotáxica.

Certifique-se de que a cabeça do animal esteja nivelada e centralizada e não possa ser movida quando levemente sondada. Uma vez que o animal esteja montado, injete 0,5 mililitros de normosol nos camundongos para hidratação e aplique lubrificante ocular para evitar o ressecamento da córnea. Monitore a profundidade da anestesia beliscando um dedo do pé dos membros posteriores. Se o reflexo de retirada estiver ausente no animal, remova os pelos do couro cabeludo do camundongo ao redor da área cirúrgica. Quando terminar, desinfete a área limpa da pele três vezes com uma aplicação alternada de etanol e iodo finalizando com iodo e injete 0,05 mililitros de bupivacaína a 0,25% por via subcutânea.

Faça uma incisão no crânio usando um bisturi e, em seguida, corte uma parte da pele com uma tesoura cirúrgica expondo o crânio. Empurre a pele para o lado antes de limpar o crânio de todos os tecidos subjacentes com um cotonete. Limpe o crânio com peróxido de hidrogênio usando cotonetes estéreis e torne as suturas do crânio, bregma e lambda visíveis. Com a broca montada estereotaxicamente, mova a ponta da broca para bregma e zero x, y e z

Depois de secar bem o crânio, aplique uma gota de adesivo dental autocondicionante com o aplicador. Aguarde 60 segundos antes de curar o adesivo dental com uma luz UV dental por 40 segundos. Uma superfície brilhante indica que o adesivo foi efetivamente reticulado com o crânio. Com a ajuda de uma broca de 0,031 polegadas, perfure cuidadosamente dois furos bilateralmente no crânio a 5.000 rotações por minuto, ou RPM, evitando perfurar o cérebro. Aplique uma gota de solução salina para melhorar a perfuração dos furos de rebarbas. Para implantação de eletrodos de profundidade do hipocampo, perfure a 3 milímetros posterior e 3 milímetros lateral do bregma.

Faça um orifício para o eletrodo de referência acima do cerebelo, atrás da lambda a 6 milímetros posterior e 0 milímetros lateral do bregma. Em seguida, monte o pedestal de seis pinos com eletrodos montados no suporte do eletrodo em uma estrutura estereotáxica. Alinhando os eletrodos acima dos orifícios correspondentes, abaixe lentamente e navegue no fone de ouvido para localizar as duas pontas dos eletrodos bipolares bem em cima dos orifícios esquerdo e direito do hipocampo e, se necessário, ajuste o eletrodo de referência para pairar acima do orifício, sobre o cerebelo.

Quando os eletrodos de torção do hipocampo estiverem logo acima dos orifícios, zere o eixo z e abaixe lentamente o eletrodo para menos três milímetros no hipocampo direito e esquerdo e guie o eletrodo de referência para o orifício acima do cerebelo. Prepare o cimento dental misturando o pó e o líquido em uma tigela e, em seguida, cubra a superfície do crânio, os eletrodos e o espaço entre a superfície do crânio e a parte inferior do pedestal com cimento dental.

Assim que o cimento secar e endurecer, retire o suporte do eletrodo do braço estereotáxico, levante o braço e remova o suporte do pedestal. Depois de administrar o camundongo por via subcutânea com cetoprofeno e normosol, remova o animal da estrutura estereotáxica para movê-lo para a almofada aquecida na gaiola do viveiro. Uma vez totalmente acordado, retorne o único animal à gaiola do viveiro, alimente-o com alimentos macios e monitore a perda de peso diariamente até 72 horas após a cirurgia.