Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:17 min. • July 8th, 2025
Colocar uma lamínula contendo uma co-cultura numa câmara de registo perfundida com uma solução extracelular oxigenada.
A co-cultura consiste em astrócitos, neurônios corticais de ratos que expressam canais iônicos sensíveis à luz fundidos a uma proteína fluorescente e neurônios derivados de iPSC que expressam outra proteína fluorescente.
Usando um microscópio confocal, identifique um neurônio fluorescente derivado de iPSC.
Avance uma pipeta de registro cheia de uma solução intracelular em direção ao neurônio para estabelecer uma configuração de célula inteira.
Mantenha um potencial de membrana negativo constante para medições de corrente precisas.
Ilumine a co-cultura com luz para ativar canais iônicos sensíveis à luz nos neurônios corticais, gerando assim um potencial de ação.
O potencial de ação causa a liberação de neurotransmissores na fenda sináptica.
Se sinapticamente conectados, os neurotransmissores se ligam a receptores no neurônio derivado de iPSC corrigido, abrindo canais iônicos e gerando correntes pós-sinápticas.
O aumento das correntes pós-sinápticas em neurônios derivados de iPSC após estimulação luminosa confirma as conexões sinápticas com os neurônios corticais.
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