Imagem da sinalização de cálcio induzida por nicotina ao longo dos axônios do hipocampo ventral em co-culturas sinápticas

Pegue co-culturas geneticamente modificadas de fatias de hipocampo ventral de camundongos e neurônios do núcleo accumbens em uma lamínula.

Os neurônios do hipocampo projetam terminais de axônio pré-sinápticos superexpressando receptores nicotínicos de acetilcolina, formando sinapses com os neurônios accumbens do núcleo pós-sináptico.

Os neurônios são carregados com um corante indicador de cálcio para medições intracelulares de cálcio.

Transfira a lamínula para uma câmara de microscópio confocal perfundida com tampão contendo íons de cálcio.

Capture imagens fluorescentes das projeções axonais do hipocampo como controle.

Perfundir nicotina, que se liga aos receptores nicotínicos de acetilcolina nos neurônios do hipocampo, desencadeando o influxo de cálcio.

Os íons de cálcio se ligam ao corante intracelular, aumentando a fluorescência.

Os axônios do hipocampo liberam neurotransmissores excitatórios, iniciando a transmissão sináptica nos neurônios do núcleo accumbens.

Lave com tampão para remover a nicotina.

Com o tempo, a ativação do receptor nicotínico de acetilcolina causa liberação de cálcio dos estoques intracelulares, levando ao aumento da fluorescência do corante e indicando sin