Testando a função nervosa sensorial em um modelo de camundongo desnervado cirurgicamente

Comece com um camundongo anestesiado com a pele dorsal exposta. Desinfete a área e cubra-a.

Faça uma incisão na linha média do pescoço até logo acima da cauda.

Puxe a pele do lado esquerdo para criar um retalho de pele e expor o tecido subjacente.

Coloque o mouse sob um microscópio e localize os nervos sensoriais.

Puxe e remova cuidadosamente esses nervos sem romper os vasos sanguíneos.

Umedeça o tecido e remova os nervos restantes do retalho cutâneo, criando uma área desnervada.

No lado direito, deixe os nervos intactos como controle. Suturar a incisão na pele.

Permita que o mouse se recupere.

Para avaliar a desnervação estável várias semanas após a cirurgia, use o mesmo camundongo desnervado com pele dorsal raspada.

Usando uma agulha, pique a área de controle, gerando uma estimulação mecânica.

Isso excita os nervos subjacentes, enviando um sinal ao cérebro e fazendo com que o camundongo responda.

No entanto, picar a área desnervada não gera uma resposta, confirmando o papel dos nervos sensoriais.

Anestesie o animal. Raspe toda a pele dorsal e limpe a área semelhante ao procedimento de biópsia. Agora, faça uma incisão usando um bisturi estéril ao longo da linha média dorsal da base do pescoço, até cerca de meio centímetro acima da cauda. Usando uma pinça romba estéril, reflita suavemente a pele do lado esquerdo, longe do flanco, para visualizar o tecido subjacente das almofadas de gordura escapular perto do pescoço até logo acima do membro posterior.

Agora, identifique os nervos cutâneos dorsais sob um microscópio de luz dissecante. Estes aparecem como fios brancos que viajam caudalmente através da fáscia translúcida da parede do tronco antes de fazer curvas acentuadas e entrar no tecido conjuntivo solto sob a pele. Em seguida, usando uma pinça ultrafina, remova os nervos exclusivamente do lado esquerdo do animal localizados nos sítios anatômicos T3 a T12, arrancando-os de onde seus segmentos se dobram na parede do tronco até os locais de entrada na pele.

Oriente a pinça verticalmente e segure os nervos cerca de meio centímetro abaixo de seus locais de curvatura. Uma vez agarrado, puxe para cima para fazer com que o nervo se estique e se separe do tecido circundante para removê-lo. Evite danificar os vasos sanguíneos adjacentes. Certifique-se de manter o tecido úmido durante todo o procedimento, aplicando periodicamente gotas de solução salina estéril a 0,9%.

Continue removendo todos os nervos que se estendem da parede do tronco até a pele, mas não interrompa os nervos dentro da fáscia densa da parede do tronco. Em seguida, remova todos os nervos do retalho de pele exposto. Essas fibras compreendem os ramos distais dos nervos cutâneos dorsais e aparecem como fios brancos ramificados localizados esporadicamente dentro do tecido conjuntivo no lado dérmico do retalho cutâneo.

Para remover esses ramos finos, posicione a pinça aproximadamente paralela à superfície dérmica, segure os nervos e puxe para cima. Remova todos os nervos visíveis dessa maneira. Não perfure os vasos sanguíneos e a pele.

Durante esta etapa, é importante evitar a ruptura dos vasos sanguíneos vizinhos. Se você encontrar um nervo com um vaso sanguíneo adjacente, siga-o ventralmente até uma área onde não haja vaso adjacente e remova-o arrancando.

Agora, reflita sem corte a pele do lado direito da incisão da linha média dorsal, mas não remova nenhum nervo. Isso servirá como controle contralateral operado de forma simulada. Por fim, suturar o animal e monitorá-lo no pós-operatório como antes. Mais tarde, para confirmar a perda estável de nervos semanas após a cirurgia, pique suavemente a área desnervada, usando uma agulha hipodérmica estéril. Observe se o animal responde normalmente estremecendo ou virando a cabeça. Se a área da pele tiver sido desnervada de forma estável, o animal exibirá pouca ou nenhuma resposta.