Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:53 min. • July 8th, 2025
Proteja uma preparação do tronco encefálico-medula espinhal de um roedor recém-nascido em uma câmara de registro com um fluxo de aCSF oxigenado. Remova o tecido fino que cobre a preparação.
A rede neuronal do tronco cerebral gera uma atividade elétrica rítmica, denominada explosão inspiratória, transmitida por meio de neurônios motores da quarta raiz nervosa ventral, ou C4, da medula espinhal para controlar a respiração.
Posicione uma pipeta de registro perto da raiz nervosa e use a sucção para puxar a raiz para dentro, formando uma vedação.
As propriedades intrínsecas dos neurônios do tronco encefálico causam o influxo de sódio, despolarizando a membrana e gerando um potencial de ação, seguido pelo escoamento de potássio para repolarização.
A hiperpolarização resultante impede novos potenciais de ação até que a ATPase de sódio-potássio utilize ATP para restaurar o potencial de membrana.
Os potenciais de ação se propagam para a raiz nervosa como explosões rítmicas.
Fluxo de aCSF privado de oxigênio para interromper a produção de ATP e prejudicar a função da ATPase, atrasando os potenciais de ação e diminuindo as explosões rítmicas.
Voltar para o aCSF oxigenado recupera o número de explosões rítmicas.
Neste procedimento, coloque o tecido nervoso na câmara de registro com o lado ventral voltado para cima. Fixe-o com pinos na parte mais baixa da medula espinhal e na parte mais rostral do tronco cerebral. Depois disso, remova a membrana aracnóide, que é um tecido fino que cobre a superfície do tecido nervoso. Tenha cuidado para não remover a pia-máter e os vasos sanguíneos do tecido nervoso. Em seguida, encha o eletrodo com ACSF.
Usando um micromanipulador, coloque cuidadosamente o eletrodo próximo à quarta raiz ventral. Aspire suavemente a raiz nervosa usando a seringa. Em seguida, coloque o eletrodo com a raiz nervosa contra a medula espinhal. Em seguida, registar as actividades electrofisiológicas geradas pelo tecido nervoso em condições normóxicas durante pelo menos 20 minutos para determinar os parâmetros basais da preparação.
Mude a solução de perfusão de ACSF com bolhas de carbogênio para estímulo de hipóxia ACSF e registre por 15 minutos. Depois disso, mude a solução de perfusão de volta para ACSF com bolhas de carbogênio padrão e grave por pelo menos mais 15 minutos antes de encerrar a gravação.