JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 3:10 min • July 8th, 2025
Comece com um rato anestesiado e adaptado ao escuro.
Aplique gotas anestésicas e dilatadoras na córnea.
Coloque o mouse em uma plataforma elevada na frente de uma cúpula com uma luz vermelha fraca.
Prenda um eletrodo de aterramento por via subcutânea na perna traseira e um eletrodo de referência dentro da boca.
Pegue um porta-eletrodo com um capilar cheio de solução salina. Deslize para remover bolhas de ar.
Encha totalmente a ponta capilar com a solução salina.
Posicione o capilar na córnea para registrar um eletrorretinograma de acoplamento direto ou DC-ERG.
O DC-ERG mede respostas elétricas sutis do epitélio pigmentar da retina ou RPE.
O EPR é uma monocamada celular especializada que mantém a saúde e a integridade estrutural das células fotorreceptoras.
Aplique uma gota de lubrificante para os olhos para manter a condutividade e evitar a dessecação.
Verifique os valores de resistência de cada olho para garantir que sejam semelhantes e dentro do intervalo.
Estabeleça uma linha de base estável e comece a gravar o DC-ERG.
Para posicionar o camundongo e os eletrodos para um experimento, anestesiar a córnea de um camundongo sedado com uma gota de ácido clorídrico de proparacaína a 0,5% antes de dilatar a córnea com uma gota de cloridrato de fenilefrina a 2,5% e tropicamida a 0,5%.
Use a etapa um de seis para acender uma luz vermelha fraca dentro da cúpula e coloque o mouse em uma mesa de gravação aquecida. Use uma pinça para segurar cuidadosamente a pele da perna traseira e, usando uma mão para segurar firmemente o eletrodo da agulha, use a outra mão para inserir o eletrodo subcutaneamente na perna traseira para prender o eletrodo no lugar.
Coloque o eletrodo de referência de prata/cloreto de prata na boca do animal de modo que o pellet centralizado fique ao longo da bochecha posterior e seja mantido no lugar atrás dos dentes.
Antes de colocar os eletrodos capilares no olho, posicione o porta-eletrodo com os capilares de vidro orientados verticalmente e mova o porta-eletrodo com o dedo indicador para remover quaisquer bolhas que possam ter sido introduzidas.
Use uma agulha de calibre 25 para preencher as pontas capilares com HBSS e inspecione os capilares para garantir que não haja bolhas de ar presas nas pontas. Posicione o suporte do eletrodo de forma que as pontas abertas dos capilares preenchidos com HBSS fiquem em contato suave com a córnea e, tomando cuidado para evitar a introdução de bolhas, inverta o dispensador de gel lubrificante para os olhos para descartar as gotas iniciais. Em seguida, coloque uma gota de gel lubrificante para os olhos em cada olho para manter a condutividade e evitar a dessecação durante a gravação.