Registros eletrofisiológicos de Drosophila Sensilla em resposta a odores voláteis

Monte uma mosca Drosophila viva em um tubo com a cabeça exposta, antenas aderidas a fita adesiva e presas por uma haste de retenção.

Mantenha a preparação sob um fluxo constante de ar umidificado para evitar a dessecação.

Insira o eletrodo de referência através do clípeo, uma estrutura de suporte que protege as peças bucais, para alcançar o sistema circulatório.

Coloque o eletrodo de gravação perto do sensillum, o órgão sensorial do inseto.

Insira o eletrodo na base do sensillum.

Registre sinais com picos específicos para confirmar o posicionamento correto do eletrodo próximo aos neurônios receptores olfativos.

Conecte um cartucho contendo o odorante de teste ao tubo de entrega.

Posicione o tubo apontando para a antena da mosca, ajustando a altura e a distância dos eletrodos.

Usando o software, defina a taxa de fluxo de odor e a quantidade de dosagem e, em seguida, libere o odorante.

Agora, registre sinais elétricos para capturar a resposta neuronal da mosca ao odorante.

Para fazer gravações, insira o eletrodo de referência no clípeo usando um movimento rápido e suave. Coloque-o logo abaixo da cutícula, onde estará em contato com a hemolinfa. Em seguida, abaixe lentamente o eletrodo de gravação até que ele entre no mesmo plano de view que o sensillum alvo. Em seguida, insira o eletrodo de registro na base sensilar.

Antes de prosseguir, certifique-se de que haja uma alta relação sinal-ruído, com picos identificáveis de neurônios at4A e at4C. O neurônio at4A não deve disparar mais rápido do que 20 hertz.

Agora, conecte o cartucho ao tubo de entrega de odor. Neste caso, um cartucho de ácido palmitoleico é conectado. Em seguida, use o micromanipulador para manobrar o cartucho em direção à preparação enquanto o aponta para a cabeça. Posicione a ponta do cartucho apontando diretamente para a antena a uma distância de cerca de 4 milímetros. O cartucho também deve estar cerca de 1 milímetro acima da corrediça.

O cartucho pode estar próximo dos eletrodos e da lâmina. Idealmente, deve estar a pelo menos quatro milímetros de cada eletrodo. Para estimulação, defina o controlador de fluxo de odor para rajadas de 500 milissegundos e use uma taxa de fluxo de 500 mililitros por minuto. Para cada explosão de estímulo, registre a atividade elétrica por 10 segundos.