Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:59 min. • July 8th, 2025
Prenda uma fatia de cunha de cérebro de camundongo transgênico em uma câmara de gravação perfundida com aCSF oxigenado.
O lado mais espesso da cunha contém a raiz do nervo auditivo e o núcleo coclear, incluindo células estreladas T e espessas globulares.
O lado mais fino contém o núcleo medial e ventral do corpo trapezoidal com neurônios olivococleares mediais fluorescentes.
Localize microscopicamente a raiz do nervo auditivo e posicione um eletrodo estimulante sobre ela.
Identifique um neurônio olivococlear medial fluorescente e avance uma pipeta de registro em direção a ele.
Corrija o neurônio para obter uma configuração de célula inteira e registre sua atividade elétrica.
Aplique pulsos elétricos na raiz do nervo auditivo, ativando as células do núcleo coclear.
As células estreladas T ativadas liberam neurotransmissores excitatórios para os neurônios olivococleares mediais.
No entanto, as células espessas globulares ativam vias inibitórias, liberando neurotransmissores inibitórios para os neurônios olivococleares mediais.
A integração dos sinais excitatórios e inibitórios resulta em correntes pós-sinápticas, confirmando a atividade neuronal dentro da fatia.
Para configurar a fatia de cunha para análise eletrofisiológica, coloque a amostra em uma câmara de registro que está sendo continuamente perfundida com 35 graus Celsius aCSF e estabilize a fatia. Usando a óptica DIC, concentre-se na raiz do nervo auditivo no lado grosso da fatia e use um micromanipulador para mover o eletrodo estimulante bipolar de tungstênio para a raiz do nervo auditivo e suavemente para a superfície do tecido.
Mova o campo de visão para o núcleo ventral do corpo trapezoidal no lado fino e selecione um neurônio olivococlear medial como alvo para eletrofisiologia patch-clamp sob epifluorescência usando um filtro de emissão de 561 nanômetros. Encha uma pipeta de registro com a solução interna apropriada para o experimento proposto e, sob óptica DIC, aplique um patch e registre do neurônio olivococlear medial na configuração de toda a célula.
Ajuste a amplitude de estimulação elétrica da raiz nervosa auditiva para obter eventos pós-sinápticos consistentes no neurônio olivococlear medial. Em seguida, execute protocolos de estimulação apropriados para observar correntes sinápticas evocadas em neurônios olivococleares mediais.