Registrando respostas sinápticas CA3-CA1 em uma fatia de hipocampo de rato

Coloque uma fatia de hipocampo de rato em uma configuração de eletrofisiologia.

Posicione os eletrodos estimulantes na camada do estrato radiado da região CA1 do hipocampo, que recebe projeções axonais dos neurônios CA3.

Coloque um eletrodo de gravação próximo aos dendritos apicais CA1.

Posicione outro eletrodo de registro na camada piramidal do estrato.

Após a estimulação, as projeções axonais CA3 despolarizam e geram potenciais de ação, liberando neurotransmissores excitatórios.

Esses neurotransmissores se ligam aos dendritos apicais CA1 pós-sinápticos, induzindo um influxo de íons positivos e despolarização da membrana, denominado potencial pós-sináptico excitatório, ou EPSP.

As medidas do eletrodo de registro somaram EPSPs dos dendritos apicais - o campo EPSP ou fEPSP. Uma vez obtidos sinais estáveis de fEPSP, abaixe os eletrodos e faça uma breve pausa.

Aplique uma faixa de intensidades de estimulação para determinar a relação de entrada-saída com a inclinação fEPSP e, em seguida, selecione e aplique uma intensidade específica com base na inclinação.

O segundo eletrodo de registro mede os potenciais de ação combinados dos corpos celulares neuronais CA1, gerando picos populacionais.

Em experimentos de marcação e captura sináptica, sob o microscópio, posicione os dois eletrodos estimulantes no estrato radiado da região CA1 para estimular as fibras colaterais de Schaffer e um eletrodo de registro na região dendrítica apical de CA1 a meio caminho entre os eletrodos estimulantes para registrar as respostas fEPSP.

Coloque outro eletrodo de gravação na camada piramidal do estrato para registrar o pico populacional. Quando todos os eletrodos tocarem a fatia, forneça uma estimulação de teste para garantir que um sinal EPSP de campo adequado possa ser obtido em ambas as entradas.

Uma vez obtido um sinal fEPSP adequado, abaixe cuidadosamente os eletrodos cerca de 200 mícrons usando os botões de movimento fino dos manipuladores e, em seguida, aguarde 20 minutos para que a fatia se recupere. Depois disso, determine a relação de entrada/saída medindo a inclinação do campo EPSP em uma faixa de intensidades de corrente de 20 microamperes a 100 microamperes.

Em seguida, para cada entrada, defina a intensidade de estimulação que evoca 40% da inclinação máxima do campo EPSP como os estímulos constantes ao longo do experimento. Após 15 a 20 minutos, comece a gravar a linha de base.

Registre uma linha de base estável de pelo menos 30 a 60 minutos antes da indução LTP/LTD.