Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:41 min. • July 8th, 2025
Prenda uma Drosophila melanogaster geneticamente modificada anestesiada de lado a uma lamínula.
Estenda as patas dianteiras e prenda-as para expor os segmentos do tarso.
Esses segmentos têm neurônios gustativos que expressam complexos indicadores de cálcio que fluorescem na forma ligada ao cálcio.
Desenhe uma barreira hidrofóbica ao redor da mosca para reter a solução.
Deixe a mosca se recuperar e sobreponha uma solução salina tamponada nos segmentos tarsais expostos para umedecê-los.
Sob um microscópio confocal, observe os segmentos do tarso e a imagem dos neurônios gustativos em várias profundidades para obter uma fluorescência de pré-estimulação.
Adicione uma solução de estimulação contendo ligantes lipofílicos no segmento.
Esses ligantes se ligam aos receptores dos neurônios gustativos, iniciando vias de sinalização e desencadeando a abertura dos canais de cálcio.
Isso permite que os íons de cálcio do fluido extracelular entrem no citoplasma e se liguem aos complexos indicadores de cálcio, resultando na emissão de fluorescência.
Quando observado novamente, um aumento na fluorescência neuronal confirma a resposta fisiológica neuronal ao ligante.
Depois de anestesiar a mosca, pre
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