Carga e descarga de corante FM mediada por microeletrodo em células nervosas de larvas de Drosophila

Comece com larvas de Drosophila, com fibras musculares e nervosas expostas imersas em uma solução contendo vesículas de corante de membrana fluorescente ou corante FM.

O corante FM se liga aos lipídios na membrana celular, formando um revestimento fluorescente sobre ela.

Usando uma unidade micromanipuladora, posicione a ponta do microeletrodo de sucção sob um microscópio.

Concentre-se nas fibras nervosas e no microeletrodo.

Use pressão negativa para sugar uma alça da fibra nervosa para o microeletrodo.

Aplique pulsos de corrente para estimular a fibra nervosa.

Isso desencadeia a junção neuromuscular, onde um neurônio motor se conecta a uma fibra muscular, para iniciar a endocitose da vesícula sináptica.

Durante esse processo, a célula envolve a membrana revestida com corante FM para formar vesículas endocíticas coradas, ideais para visualizar estágios pré-sinápticos de neurotransmissão.

Lave o corante FM e substitua a solução externa.

Aplique pulsos de corrente para descarregar as vesículas coradas com corante FM para fora da célula.

Para estimulação elétrica, prepare uma pipeta de sucção usando o extrator de microeletrodo para obter a conicidade e o tamanho da ponta necessários. D