Eletrofisiologia Optogenética Registro de Células com Canais Iônicos Dependentes de Luz

Coloque uma lamínula contendo células renais embrionárias que expressam canais iônicos dependentes de luz e uma proteína repórter fluorescente em uma câmara de medição aplicada com silício. Feche-o e adicione um buffer externo.

Posicione esta câmara sob um microscópio. Coloque um eletrodo de banho cheio de ágar. Perfunda com um tampão para remover meios residuais e células mortas.

Usando um filtro de fluorescência, identifique e concentre-se na célula-alvo.

Conecte uma pipeta de patch a um micromanipulador. Aplique pressão para evitar entupimento e aproxime-se da célula.

Posicione a pipeta perto da célula e libere pressão positiva para formar um adesivo de membrana na ponta.

Depois de formar o adesivo de membrana, aplique pressão negativa para romper a membrana.

Aplique uma luz de um comprimento de onda específico para abrir os canais iônicos. O movimento dos íons é registrado como mudança de tensão pelo eletrodo.

Para começar, sele a câmara de medição com silicone para evitar vazamento do tampão externo. Em seguida, coloque uma lamínula na câmara e feche-a. Encha a câmara cuidadosamente com tampão extracelular para evitar que as células se desprendam. Em seguida, coloque a câmara