Gravações perfuradas de patch-clamp de corpos celulares de neurônios sensoriais do ouvido interno

Coloque uma cultura de corpos celulares de neurônios sensoriais do ouvido interno em uma câmara de registro.

Encha frontalmente uma pipeta patch-clamp com uma solução interna.

Preencha com a mesma solução contendo um antibiótico perfurante de membrana, permitindo que ele atinja gradualmente a ponta.

Encha dois terços da pipeta com a solução antibiótica, insira-a em um suporte contendo um eletrodo de registro e abaixe-a na câmara.

Visualize sob um microscópio para se aproximar de um neurônio.

À medida que a ponta da pipeta entra em contato com o neurônio, a superfície neuronal forma uma covinha e a resistência aumenta.

Aplique pressão negativa para formar uma vedação hermética entre a pipeta e a membrana.

Mantenha o potencial de retenção próximo ao potencial de membrana em repouso.

O antibiótico perfura a membrana, permitindo o movimento de íons entre a célula e o eletrodo para estabelecer um ambiente iônico estável.

Aplique etapas de tensão para abrir canais iônicos dependentes de tensão, permitindo o influxo de íons e gerando correntes proporcionais à função do canal iônico, que são registradas pelo eletrodo.

Mergulhe a ponta da pipeta na solução limpa da placa de cultura, para en