Impacto da estimulação por corrente contínua em crises epilépticas evocadas em fatias de cérebro de camundongos

Pegue uma fatia de cérebro de camundongo contendo o tálamo medial, ou MT, projetando-se para o córtex cingulado anterior, ou ACC.

Prenda a fatia em uma câmara de matriz de multieletrodos perfundida com aCSF oxigenado para registrar sinais elétricos.

Coloque eletrodos positivos e negativos e aplique estimulação de corrente contínua, ou DCS, gerando um campo elétrico através da fatia.

Desative o DCS e coloque um eletrodo no MT. Forneça um estímulo para evocar potenciais de ação nos neurônios talâmicos, desencadeando a liberação de neurotransmissores.

Os neurotransmissores desencadeiam o influxo de íons nos neurônios ACC e geram sinais elétricos, denominados respostas sinápticas evocadas por estimulação.

Reative o DCS para monitorar seus efeitos nas respostas sinápticas do ACC.

Em seguida, desative o DCS e introduza medicamentos indutores de convulsões.

As drogas aumentam a excitabilidade neuronal, fazendo com que o estímulo talâmico produza rajadas contínuas de sinais no ACC, denominadas crises epilépticas evocadas.

Finalmente, reative o DCS para avaliar seu efeito nas convulsões, medindo a redução na amplitude e duração das convulsões.

Neste procedimento, assegure a geração de campos elétricos uniformes passando correntes entre dois fios de prata paralelos revestidos com cloreto de prata que são colocados dentro da câmara MEA. Se não houver problemas, o DCS deve ficar entre 0,5 e 2 miliamperes.

Em seguida, desligue o DCS e estimule o tálamo com um eletrodo de tungstênio. Para obter respostas sinápticas máximas no ACC, registre de 10 a 20 respostas e calcule a média. Em seguida, ligue o DCS e estimule o tálamo simultaneamente. Avalie as mudanças de amplitude da resposta ACC evocada por estimulação talâmica durante a DD.

Agora, desligue o DCS. Adicione 250 micromolares 4-AP e 5 micromolares bicuculinos à solução de perfusão e aguarde duas a três horas. Se as drogas afetarem a fatia do cérebro, a fatia deve produzir respostas de convulsão cortical. Posteriormente, colete de 10 a 20 respostas corticais cinguladas anteriores e meça a amplitude e a duração das respostas de convulsão cortical evocadas eletricamente.

Em seguida, ligue o DCS e estimule o tálamo simultaneamente. Avalie as mudanças na amplitude e duração das respostas de convulsão cortical evocadas durante a aplicação do DCS. Depois disso, substitua a solução de perfusão por aCSF fresco para lavar os medicamentos.