Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:41 min. • July 8th, 2025
Comece com um dispositivo microfluídico compartimentado revestido de laminina posicionado sobre uma matriz de multieletrodos padronizada ou MEA.
O dispositivo transporta neurônios glutamatérgicos corticais derivados de iPSC cultivados aderidos a microeletrodos de um MEA.
Esses neurônios se comunicam por meio de sinais elétricos. Registre esses sinais como atividade neuronal basal.
Em seguida, semeie o dispositivo com células de glioma pediátricas de alto grau ricas em glutamato, um tipo de célula tumoral cerebral, e incuba.
Com o tempo, as células do glioma entram no canal e se ligam, estabelecendo a co-cultura. Mais tarde, as células do glioma liberam glutamato, um neurotransmissor excitatório.
O glutamato liberado interage com os receptores neuronais, levando a um influxo de íons de cálcio e sódio que causa a despolarização da membrana neuronal.
Isso induz a excitabilidade neuronal e aumenta a atividade neuronal.
Registre novamente os sinais elétricos e um aumento significativo após a co-cultura indica uma interação bem-sucedida entre neurônios e células de glioma.
Semeie as células tripsinizadas UW479 e BT35 em cima dos neurônios glutamatérgicos aderentes maduros em cada dispositivo microfluídico dedicado. Manter as co-culturas por dois dias em ambiente controlado a 37 graus Celsius e 5% de dióxido de carbono com neurônio glutamatérgico D11 e meio posterior.
Conte as células pediátricas de glioma de alto grau usando as imagens microscópicas analisadas com o software de análise de imagem para avaliar sua viabilidade e calcular a porcentagem de células. Colocar o MFD no dispositivo de registro e usar um software disponível comercialmente para realizar o registro eletrofisiológico dos neurônios glutamatérgicos no 21º dia.
Antes de semear células pediátricas de glioma de alto grau, realizar um segundo registro eletrofisiológico dos neurônios glutamatérgicos diferenciados cultivados como controle, paralelamente à co-cultura.