Avaliando os efeitos das toxinas no desenvolvimento da rede neural de embriões de galinha usando matrizes de multieletrodos

Comece com culturas aderentes de neurônios embrionários iniciais de pintinhos em matrizes multieletrodos revestidas com matriz extracelular, ou MEAs.

A base dos MEAs contém grades de minúsculos eletrodos que registram a atividade neuronal.

Na cultura de teste, os neurônios crescem na presença de uma toxina, enquanto na cultura de controle, os neurônios crescem sem a toxina.

Antes de gravar, substitua a mídia em ambos os MEAs por mídia livre de toxinas e incube brevemente.

Em seguida, coloque um MEA no dispositivo de gravação e comece a gravar.

Os neurônios se comunicam por meio de impulsos elétricos chamados potenciais de ação ou picos.

Na sinapse, esses potenciais de ação desencadeiam a liberação de neurotransmissores, propagando o sinal para o próximo neurônio.

Os eletrodos MEA registram os picos gerados pelos neurônios conectados sinapticamente.

Na condição de controle, a rede neuronal madura saudável exibe atividade de pico síncrona.

Na cultura de teste, a redução do pico e da sincronia sugere maturação da rede neuronal prejudicada causada pela toxina.

No dia da aquisição, substitua o meio de cultura por meio neurobasal fresco e devolva as matrizes à incubadora de CO₂ por no mínimo duas horas antes da gravação. Inicie o software de gravação e defina a temperatura do conjunto de vários eletrodos para 37 graus Celsius clicando no ícone de temperatura. Defina os parâmetros de aquisição selecionando fluxos no painel esquerdo da janela e clicando com o botão direito do mouse no ícone do musa. Em seguida, selecione Adicionar Detector de Processamento e Pico e clique em OK na janela pop-up. O Spike Detector 6 da STD aparecerá abaixo do nome do arquivo.

Em seguida, clique com o botão direito do mouse no Detector de Picos, selecione Adicionar Detector de Processamento e Explosão e clique em OK na janela pop-up. O Detector de Explosão ISI aparecerá abaixo do ícone do Muse. Em seguida, clique com o botão direito do mouse em Burst Detector, selecione Adicionar Compilador de Processamento e Estatísticas Neurais. Na janela pop-up, certifique-se de que Cabeçalho do arquivo, Estatísticas agregadas do poço e Sincronia estejam selecionados. Clique em OK.

O Compilador de Estatísticas aparecerá abaixo. Clique no ícone do relógio na parte inferior da tela e altere as informações na seção Configurações para gravar a cada 5,1 minutos e gravar por cinco minutos. Isso será iniciado imediatamente e será executado uma vez. Depois de recuperar a matriz de vários eletrodos da incubadora, coloque-a na unidade de gravação e trave-a no lugar. Comece a gravar a atividade da rede clicando em Iniciar gravação na seção de gravação agendada.