Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:07 min. • July 8th, 2025
Comece com culturas aderentes de neurônios embrionários iniciais de pintinhos em matrizes multieletrodos revestidas com matriz extracelular, ou MEAs.
A base dos MEAs contém grades de minúsculos eletrodos que registram a atividade neuronal.
Na cultura de teste, os neurônios crescem na presença de uma toxina, enquanto na cultura de controle, os neurônios crescem sem a toxina.
Antes de gravar, substitua a mídia em ambos os MEAs por mídia livre de toxinas e incube brevemente.
Em seguida, coloque um MEA no dispositivo de gravação e comece a gravar.
Os neurônios se comunicam por meio de impulsos elétricos chamados potenciais de ação ou picos.
Na sinapse, esses potenciais de ação desencadeiam a liberação de neurotransmissores, propagando o sinal para o próximo neurônio.
Os eletrodos MEA registram os picos gerados pelos neurônios conectados sinapticamente.
Na condição de controle, a rede neuronal madura saudável exibe atividade de pico síncrona.
Na cultura de teste, a redução do pico e da sincronia sugere maturação da rede neuronal prejudicada causada pela toxina.
No dia da aquisição, substitua o meio de cultura por meio neurobasal fresco e devolva as matrizes à incubadora de CO2 por no mínimo duas horas antes da gravação. Inicie o software de gravação e defina a temperatura do conjunto de vários eletrodos para 37 graus Celsius clicando no ícone de temperatura. Defina os parâmetros de aquisição selecionando fluxos no painel esquerdo da janela e clicando com o botão direito do mouse no ícone do musa. Em seguida, selecione Adicionar Detector de Processamento e Pico e clique em OK na janela pop-up. O Spike Detector 6 da STD aparecerá abaixo do nome do arquivo.
Em seguida, clique com o botão direito do mouse no Detector de Picos, selecione Adicionar Detector de Processamento e Explosão e clique em OK na janela pop-up. O Detector de Explosão ISI aparecerá abaixo do ícone do Muse. Em seguida, clique com o botão direito do mouse em Burst Detector, selecione Adicionar Compilador de Processamento e Estatísticas Neurais. Na janela pop-up, certifique-se de que Cabeçalho do arquivo, Estatísticas agregadas do poço e Sincronia estejam selecionados. Clique em OK.
O Compilador de Estatísticas aparecerá abaixo. Clique no ícone do relógio na parte inferior da tela e altere as informações na seção Configurações para gravar a cada 5,1 minutos e gravar por cinco minutos. Isso será iniciado imediatamente e será executado uma vez. Depois de recuperar a matriz de vários eletrodos da incubadora, coloque-a na unidade de gravação e trave-a no lugar. Comece a gravar a atividade da rede clicando em Iniciar gravação na seção de gravação agendada.