Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:50 min. • July 8th, 2025
Pegue um chip microfluídico contendo neurônios do hipocampo de ratos.
O chip apresenta reservatórios somáticos e axonais, com compartimentos divididos por microsulcos, compartimentando efetivamente os neurônios e isolando as regiões somáticas e axonais.
Remova a mídia e adicione formaldeído. Incubar para fixar os neurônios e preservar sua estrutura.
Remova o excesso de formaldeído e lave com tampão. Em seguida, adicione um detergente para permeabilizar os neurônios.
Substitua o detergente por uma solução de bloqueio para bloquear locais de ligação não específicos.
Remova a solução de bloqueio e incube com anticorpos primários que se ligam a marcadores sinápticos neuronais específicos, que são proteínas integrais da membrana nas vesículas sinápticas.
Remova os anticorpos não ligados e lave com tampão.
Incubar com anticorpos secundários marcados com fluoróforo que se ligam aos anticorpos primários direcionados aos marcadores sinápticos.
Remova os anticorpos secundários não ligados e lave com tampão.
Sob um microscópio confocal, crie imagens do chip para visualizar os marcadores sinápticos neuronais fluorescentes.
Para iniciar a imunocoloração de fluorescência, remova a maior parte do
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