Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:45 min. • July 8th, 2025
Pegue os neurônios corticais primários de ratos em um prato com fundo de vidro revestido de polímero.
Fixe os neurônios com paraformaldeído para preservar as estruturas celulares.
Lave o excesso de paraformaldeído.
Adicione um detergente não iônico para permeabilizar as células.
Trate as células com uma coloração fluorescente verde direcionada à proteína estrutural actina filamentosa, ou F-actina.
Remova o excesso de mancha.
Aplique um agente bloqueador para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Incubar com anticorpos primários que têm como alvo as proteínas dendríticas.
Remova os anticorpos não ligados.
Adicione anticorpos secundários conjugados com fluoróforo vermelho para se ligar aos anticorpos primários. Lave o excesso de anticorpos.
Aplique um corante fluorescente para manchar os núcleos. Remova o corante não ligado.
Adicione um reagente antidesbotamento para evitar o fotobranqueamento com fluoróforo.
Usando microscopia fluorescente, capture imagens dos neurônios.
Identifique uma região rica em F-actina dentro do dendrito marcado.
Usando o software, conte os pontos ou manchas de F-actina e rastreie manualmente o comprimento do dendrito para calcular a densidade de F
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