Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:15 min. • July 8th, 2025
Pegue um rato anestesiado e aplique um anestésico em seu olho para entorpecer os reflexos.
Apare os bigodes e desinfete a área ao redor do olho para evitar contaminação.
Sob um microscópio, prenda a pálpebra inferior para abaular o olho, expondo a veia episcleral.
Essa veia se conecta à câmara anterior através do canal de Schlemm e da malha trabecular para a saída do humor aquoso.
Insira uma microagulha com solução salina hipertônica na veia exposta.
Injete a solução salina, deslocando o sangue. Execute uma segunda injeção oposta à primeira para um efeito uniforme em todo o olho.
A solução salina entra na malha trabecular.
A alta concentração de sal causa estresse osmótico, levando à morte celular e cicatrizes nos tecidos. Essa cicatriz bloqueia o fluxo de humor aquoso através da malha, aumentando a pressão intraocular.
A pressão elevada danifica as células ganglionares da retina, que são neurônios que transportam informações visuais para o cérebro. O dano leva ao glaucoma, uma condição que causa perda de visão.
Neste procedimento, após anestesiar o animal com o coquetel KAX, verifique os reflexos beliscando seus pés ou cauda para garantir que o animal esteja inconsciente. Em seguida, apare os bigodes com uma tesoura. Em seguida, sature um aplicador de ponta de algodão com solução de betadina e esfregue a área ao redor do olho experimental.
Sob o microscópio, use um hemostático para prender a pálpebra inferior a fim de protuberância do olho, expor a veia episcleral e restringir o movimento do olho. Em seguida, perfure cuidadosamente a veia episcleral com a microagulha em um ângulo entre 10 e 20 graus em relação à veia. Uma punção na veia é bem-sucedida quando se observa que o sangue entra na ponta da microagulha.
Injete lentamente 50 microlitros de solução salina na veia. As veias ficarão brancas à medida que o sal circula pela vasculatura, mas algumas regiões podem manter uma aparência vermelho-sangue.
A etapa mais crítica neste procedimento ocorre durante a injeção da solução salina de dois molares. É imperativo que ocorra branqueamento na vasculatura para garantir um resultado bem-sucedido. Manter uma agulha estável em um ângulo de 20 graus é crucial para este procedimento.
Depois disso, execute uma segunda injeção na veia para garantir danos completos à camada de células ganglionares da retina. Em poucos minutos, deve-se ver uma aparência turva distinta através da íris do olho à medida que o sal circula pelo sistema vascular.