JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 2:59 min • July 8th, 2025
Tome uma suspensão de citomegalovírus murino, geneticamente modificado para expressar uma proteína fluorescente verde aprimorada, permitindo a visualização.
Carregue a suspensão em uma seringa com uma agulha acoplada.
Em seguida, anestesie um filhote de rato colocando-o no gelo.
Identifique o local da injeção na cabeça do filhote.
Insira a agulha perpendicularmente à superfície do crânio até atingir o ventrículo lateral, um líquido cefalorraquidiano ou uma cavidade cheia de LCR no cérebro.
Injete a suspensão no ventrículo lateral.
Permita que o filhote se recupere.
O vírus injetado circula pelo LCR ventricular, atingindo as células ependimárias da área marginal e as células epiteliais do plexo coróide.
O vírus se liga aos receptores de superfície nessas células, internaliza-se, sofre replicação e se espalha de célula para célula, estabelecendo uma infecção aguda no plexo coroide, na área marginal e na zona subventricular.
Comece esterilizando uma seringa de 10 microlitros e uma agulha de calibre 27 com álcool 70%. Em seguida, carregue 5 microlitros de solução de injeção de citomegalovírus murino ou microesferas fluorescentes na agulha, puxando cuidadosamente o êmbolo da seringa.
Depois de anestesiar e imobilizar um camundongo neonatal P0.5, colocando-o no gelo por três a quatro minutos, use o método de resposta ao pinçamento do dedo do pé para determinar a profundidade da anestesia. Marque o local da injeção no camundongo anestesiado com uma caneta de laboratório não tóxica em um local aproximadamente 0,7 a 1,0 milímetros lateral à sutura sagital e 0,7 a 1,0 milímetros caudal do bregma neonatal. Este diagrama mostra o site com mais detalhes.
Para referência, marque 2 milímetros da ponta da agulha com um marcador não tóxico. Em seguida, insira a agulha com 2 milímetros de profundidade, perpendicular à superfície do crânio no local da injeção marcado. Em seguida, injete lentamente 5 microlitros de citomegalovírus murino no ventrículo lateral sem abrir o couro cabeludo.
Em outro grupo de camundongos, injete uma solução de 5 microlitros contendo microesferas fluorescentes pelo mesmo método. Após a injeção, deixe a agulha permanecer no lugar por 10 a 20 segundos para evitar o refluxo. Em seguida, remova lentamente a agulha. Deixe os animais injetados recuperarem durante 5 a 10 minutos num recipiente quente até que o movimento e a capacidade de resposta geral sejam restabelecidos.