Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:08 min. • July 8th, 2025
Pegue seções organoides cerebelares fixas compreendendo tipos distintos de neurônios cerebelares.
Lave as seções no tampão para remover a mídia de incorporação residual.
Incubar em glicina para bloquear a fixação de locais reativos residuais, reduzindo a ligação inespecífica durante a imunocoloração.
Adicione um detergente não iônico para permeabilizar as células.
Lave com tampão, retirando o excesso de detergente.
Agora, seque a lâmina. Transfira-o para uma placa de imunocoloração com papel embebido em tampão para evitar o ressecamento do tecido.
Aplique uma solução de bloqueio que se liga a locais não específicos nos neurônios.
Remova a solução de bloqueio. Incubar com anticorpos primários, que se ligam a antígenos-alvo dentro dos neurônios cerebelares.
Lave com tampão, removendo os anticorpos não ligados.
Incubar com anticorpos secundários ligados ao fluoróforo para ligar anticorpos primários ligados ao antígeno.
Em seguida, lave com tampão, removendo os anticorpos não ligados.
Adicione um corante para corar os núcleos celulares.
Usando microscopia de fluorescência, visualize marcadores expressos em neurônios cerebelares, indicando maturação organoide.
Lave as lâminas do microsc
Veja a transcrição completa e aceda a milhares de vídeos científicos