Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 5:20 min. • July 8th, 2025
Coloque os cérebros de Drosophila do tipo selvagem e mutante em uma solução contendo um fixador e um detergente. Incube com um balanço suave.
O fixador preserva a morfologia do tecido, enquanto o detergente permeia as membranas celulares.
Deixe o cérebro se assentar e remova a solução.
Lave os lenços com um tampão.
Adicione uma solução de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Remova a solução e adicione anticorpos primários direcionados a uma proteína específica que regula o desenvolvimento axonal nos neurônios do corpo do cogumelo do cérebro, ou MB.
Incubar para promover a ligação de anticorpos.
Lave com tampão para remover anticorpos não ligados.
Incubar com anticorpos secundários conjugados com fluoróforo direcionados aos anticorpos primários.
Lave novamente para remover os anticorpos não ligados e, em seguida, ressuspenda os cérebros em um meio de montagem.
Monte os cérebros em uma lâmina de ponte e visualize-os sob um microscópio de fluorescência.
Em comparação com o tipo selvagem, os cérebros mutantes exibem um fenótipo defeituoso, com projeções axonais incorretas e lobos MB ausentes.
Sob o microscópio, use uma pipeta P200 para transferir 10 a 15 céreb
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