Induzindo neuroinflamação em larvas de peixe-zebra com injeção de lipopolissacarídeo

Pegue as larvas de peixe-zebra anestesiadas em um prato forrado com gel de agarose e certifique-se de que o cérebro esteja voltado para cima para a injeção.

Posicione o prato sob um microscópio para visualizar os ventrículos cerebrais, que são cavidades cheias de líquido dentro do cérebro em desenvolvimento.

Pegue uma agulha de microinjeção contendo uma solução de lipopolissacarídeos, ou LPS, um componente bacteriano para desencadear uma resposta imune.

Posicione a agulha acima do tectum cerebral, uma região que contém neurônios e células imunes residentes, particularmente a microglia.

Perfure o cérebro com a agulha e injete a solução de LPS no ventrículo.

A microglia no tecido circundante se liga ao LPS por meio de receptores toll-like.

A ligação desencadeia a liberação de citocinas pró-inflamatórias, que recrutam neutrófilos para o local, levando à neuroinflamação.

Os neutrófilos geram explosões de espécies reativas de oxigênio e liberam enzimas proteolíticas, resultando na morte neuronal.

Transfira as larvas induzidas por neuroinflamação para um meio de cultura para mantê-las para ensaios a jusante.

Configure o micromanipulador de modo que a ponta da agulha do aparelho de microi