Modelagem da morte neuronal induzida por espécies reativas de oxigênio em neurônios de grânulos cerebelares de camundongos

Pegue uma cultura de neurônios granulares cerebelares primários de camundongos.

Adicione meios contendo peróxido de hidrogênio, uma espécie reativa de oxigênio ou ROS, e incube brevemente.

O peróxido de hidrogênio se difunde nas células e é convertido em radicais livres altamente reativos.

Esses radicais induzem a peroxidação lipídica, comprometendo a integridade da membrana celular.

Além disso, os radicais causam modificações oxidativas nas proteínas celulares, prejudicando sua função.

Além disso, eles induzem quebras de DNA, levando à instabilidade genômica.

Os radicais também causam danos oxidativos às organelas intracelulares, incluindo as mitocôndrias.

Em resposta, as mitocôndrias danificadas liberam o citocromo c, que se liga ao fator de ativação da protease apoptótica-1, desencadeando a formação de apoptossomas e a conversão de pró-caspase-9 em caspase-9 ativa.

A caspase 9 ativa as caspases executoras, clivando ainda mais as proteínas celulares e levando à morte neuronal apoptótica.

Substitua o meio por um meio novo e sem peróxido de hidrogênio para interromper a cascata de sinalização.

Para a morte celular induzida por ROS, trate os neurônios com peróxido de hidrogênio a 75 a 100 micromolares por cinco minutos. Após cinco minutos, mude-o para o meio condicionado de culturas paralelas.

Devido à instabilidade do peróxido de hidrogênio, a concentração deve ser otimizada para um nível que induza entre 50% e 70% de morte celular após 24 horas. Essa concentração é geralmente entre 75 e 100 micromolares.