JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 1:59 min • July 8th, 2025
Pegue uma cultura de neurônios granulares cerebelares primários de camundongos.
Adicione meios contendo peróxido de hidrogênio, uma espécie reativa de oxigênio ou ROS, e incube brevemente.
O peróxido de hidrogênio se difunde nas células e é convertido em radicais livres altamente reativos.
Esses radicais induzem a peroxidação lipídica, comprometendo a integridade da membrana celular.
Além disso, os radicais causam modificações oxidativas nas proteínas celulares, prejudicando sua função.
Além disso, eles induzem quebras de DNA, levando à instabilidade genômica.
Os radicais também causam danos oxidativos às organelas intracelulares, incluindo as mitocôndrias.
Em resposta, as mitocôndrias danificadas liberam o citocromo c, que se liga ao fator de ativação da protease apoptótica-1, desencadeando a formação de apoptossomas e a conversão de pró-caspase-9 em caspase-9 ativa.
A caspase 9 ativa as caspases executoras, clivando ainda mais as proteínas celulares e levando à morte neuronal apoptótica.
Substitua o meio por um meio novo e sem peróxido de hidrogênio para interromper a cascata de sinalização.
Para a morte celular induzida por ROS, trate os neurônios com peróxido de hidrogênio a 75 a 100 micromolares por cinco minutos. Após cinco minutos, mude-o para o meio condicionado de culturas paralelas.
Devido à instabilidade do peróxido de hidrogênio, a concentração deve ser otimizada para um nível que induza entre 50% e 70% de morte celular após 24 horas. Essa concentração é geralmente entre 75 e 100 micromolares.