Determinando a toxicidade induzida por nanopartículas em neurônios usando microglia como biossensor substituto

Faça culturas microgliais em uma placa de vários poços contendo meio.

Substitua metade do meio no poço de teste por meio contendo nanopartículas de prata e no poço de controle por meio do veículo. Incubar.

A microglia internaliza as nanopartículas, é ativada e libera citocinas pró-inflamatórias.

Transferir o meio do veículo e o meio condicionado que contém estas citocinas para filtros instalados nos tubos de recolha.

Centrifugue para remover as nanopartículas, retendo as citocinas.

Inverta os filtros em novos tubos de coleta, centrifugue e colete a mídia. Adicione novas mídias.

Em seguida, faça culturas neuronais hipotalâmicas.

Substitua metade do meio do poço de controle por meio do veículo e o meio do poço de teste por meio condicionado. Incubar.

As citocinas se ligam a receptores nos neurônios hipotalâmicos, ativando vias de sinalização que induzem a morte neuronal.

Adicione a resazurina e incube.

Em células vivas, as enzimas desidrogenase reduzem a resazurina fracamente fluorescente a resorufina fluorescente.

Meça a fluorescência.

A fluorescência reduzida indica aumento da morte neuronal hipotalâmica, sugerindo neurotoxicidade induzida por nanopartículas.

Para começar, colete 2