Imunocoloração de tecidos craniofaciais de camundongos

Faça criossecções de tecidos craniofaciais embrionários fixos de camundongos compreendendo células da crista neural.

Lave as seções em tampão contendo um detergente não iônico para remover o meio de inclusão e permeabilizar as membranas, permitindo o acesso aos alvos intracelulares.

Adicione solução de bloqueio para saturar locais de ligação não específicos.

Remova o excesso de solução de bloqueio. Em seguida, incube com anticorpos primários direcionados a antígenos nucleares, como fatores de transcrição e marcadores de proliferação.

Lave com tampão para remover anticorpos não ligados.

Incubar com anticorpos secundários conjugados com fluoróforo para se ligar aos anticorpos primários ligados ao antígeno.

Remova os anticorpos não ligados usando tampão.

Adicione um meio anti-desbotamento com um corante nuclear fluorescente e cubra com uma lamínula.

O corante mancha os núcleos e o meio antidesbotamento protege os sinais fluorescentes durante a imagem.

Visualize as seções sob um microscópio de fluorescência para avaliar a expressão e localização do marcador nuclear, indicando a proliferação de células da crista neural e a atividade de sinalização.

Enxágue as lâminas em PBST a 0,1% três