Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 4:04 min. • July 8th, 2025
Comece com Drosophila thoraces de tipo selvagem e transgênico quimicamente fixados em um tampão.
Nos torácios transgênicos, as junções neuromusculares dos músculos longitudinais dorsais contêm neurônios que expressam uma proteína mutante que induz a neurodegeneração.
Remova o tampão e congele rapidamente os toráceos para evitar danos aos tecidos durante a bissecção.
Adicione tampão fresco e transfira os torácios para placas de dissecação.
Posicione o lado ventral do tórax para cima e remova os aglomerados de células nervosas para expor a linha média.
Bissetriz ao longo da linha média para obter hemitórax.
Remova o excesso de tecido.
Incube os hemitórax em um tampão de bloqueio para permeabilizar as membranas e evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Adicione anticorpos conjugados com fluoróforo direcionados a uma glicoproteína expressa em neurônios NMJ e filamentos de actina muscular.
Remova os anticorpos não ligados.
Organize os hemitórax em uma lâmina de ponte, adicione mídia de montagem e monte os tecidos.
Visualize sob um microscópio.
Em comparação com o tipo selvagem, os mutantes apresentam coloração neuronal reduzida, indicando neurodegeneração, enquanto os músculos e
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