Gerando um modelo de camundongo com lesão cerebral traumática usando uma sonda impactadora

Comece com um rato imobilizado e anestesiado com a cabeça raspada.

Aplique uma pomada para os olhos e desinfete o couro cabeludo com iodo.

Remova o excesso de iodo e cubra o mouse com uma cortina cirúrgica.

Faça uma incisão na linha média para expor o crânio e limpar a ferida.

Marque um círculo em um lado do crânio, visando o córtex cerebral.

O córtex contém neurônios motores e sensoriais cruciais para a transmissão de sinais entre o cérebro e o corpo.

Perfure o osso do crânio sobre a marcação de forma circular e, em seguida, remova a aba óssea para expor o córtex.

Posicione uma sonda de impacto esterilizada sobre a área exposta. Bata a sonda sobre o tecido para fornecer alta pressão.

Essa pressão induz trauma no córtex cerebral, interrompendo os neurônios motores e sensoriais e prejudicando a transmissão do sinal.

Limpe a ferida e suture-a. O modelo de camundongo com lesão cerebral traumática está pronto para novos experimentos.

Para realizar uma craniectomia unilateral, confirme a falta de resposta ao beliscão do dedo do pé no camundongo anestesiado e prenda o mouse em uma estrutura estereotáxica. Aplique pomada oftálmica antibiótica nos olhos com um cotonete estéril e uma solução à base de iodo na área do couro cabeludo raspado. Retirar o iodo com etanol a 70% e cobrir o animal com campo cirúrgico fenestrado.

Faça uma incisão na linha média de 1,5 a 2 centímetros no couro cabeludo e use cotonetes estéreis para limpar a ferida e limpar a fáscia à esquerda da linha média na bregma. Use uma sonda de impacto para identificar o local da craniectomia e defina o ponto de referência estereotáxico x igual a 0, y igual a 0 como bregma. Ajuste a sonda lateralmente a dois milímetros à esquerda da linha média. Use um marcador de ponta fina cirurgicamente seguro para marcar um círculo de cinco milímetros de diâmetro ao redor da área de impacto presumida.

Levante e gire o pêndulo para fora da posição e complete o círculo de 5 milímetros. Volte a colocar brevemente o impactor na posição para verificar a precisão do círculo de 5 milímetros. Em seguida, levante e gire o impactor para fora da posição e use uma ferramenta manual de kit de micromotor rotativo de alta velocidade equipada com uma ponta redonda de broca de pássaro de 0,6 ou 0,8 milímetros para fazer um orifício aberto no crânio a 70% a 80% da velocidade máxima. Aplique uma leve pressão no crânio enquanto perfura ao longo do contorno circunferencial de 5 milímetros para afinar essa borda e use uma pinça para levantar o retalho ósseo resultante.

A perfuração através de linhas de sutura pode apresentar dificuldade adicional, pois o osso é interrompido e requer pressão adicional. Os vasos sanguíneos podem estar em estreita associação e, portanto, eventos hemorrágicos são prováveis.

Para induzir uma lesão leve por impacto cortical controlado, limpe a sonda do impactor com uma almofada de preparação de álcool estéril e mova a sonda do impactor de volta à posição sobre o córtex exposto. Abaixe a sonda até que ela toque a superfície da dura-máter e marque esta posição como z igual a 0. Retire o pistão e mova para z igual a menos 1 milímetro e descarregue o pistão para impactar o córtex. Levante imediatamente o pistão e mova o braço para fora da posição, e irrigue o córtex com um volume generoso de solução salina, e use pontos simples interrompidos e sutura de seda 5-0 para fechar a incisão no couro cabeludo.