Estabelecendo uma infecção ativa pelo HIV em um modelo de rato

Comece com um rato anestesiado, desinfete sua cabeça raspada e prenda-o em um aparelho estereotáxico.

Faça uma incisão na linha média para expor o crânio.

Marque duas posições no crânio e faça pequenos furos.

Anexe uma seringa com vírus quiméricos contendo RNA do HIV ecotrópico dentro de um vetor lentiviral ao aparelho estereotáxico.

Insira a agulha no orifício, visando as células do córtex cerebral, incluindo a microglia, as células imunológicas do cérebro.

Injete lentamente os vírus para sua distribuição uniforme no córtex.

Após a injeção, suturar a incisão, desinfetar a área e permitir que o rato se recupere.

O vírus injetado interage com os receptores das células cerebrais, se funde e libera o RNA do HIV no citoplasma.

O RNA é transcrito reversamente em DNA e se integra ao DNA da célula.

A célula infectada expressa os componentes virais, produzindo novo RNA e proteínas.

Estes se reúnem e liberam como novos vírus, que aumentam a carga viral no cérebro, estabelecendo uma infecção ativa pelo HIV.

Para a injeção de EcoHIV EGFP, após confirmar a falta de resposta ao reflexo pedal, raspe o cabelo da região do cérebro e esterilize a pele exposta 2 vezes com etanol a 70% e um esfoliante à base de clorexidina. Prenda o rato em decúbito ventral em um aparelho estereotáxico e faça uma incisão de 5 a 6 centímetros através da pele ao longo da linha média do couro cabeludo.

Marque uma posição de perfuração a 0,8 milímetros lateral e uma rostral de 1,2 milímetros a bregma e faça um orifício de 0,4 milímetros de diâmetro em cada posição do crânio. Carregue 1,04 vezes 10 elevado à sexta unidade de transdução por mililitro de solução titulada de lentivírus EcoHIV em uma seringa de injeção de 10 microlitros e prenda a seringa ao aparelho estereotáxico.

Mova a agulha para perto da superfície de um furo e insira a agulha 2,5 milímetros no furo. Infundir 1 microlitro de solução de vírus a uma taxa de 0,2 microlitros de vírus por minuto. Quando todo o vírus tiver sido injetado, deixe a agulha dentro da área de injeção por cinco minutos antes de retrair lentamente a agulha até que esteja fora do crânio do rato.

Feche a incisão na pele com uma sutura de fio de seda 4-0 e esterilize a solução com etanol a 70%. Em seguida, coloque o rato em uma câmara de recuperação com uma almofada de aquecimento com monitoramento até a decúbito.