Induzindo Infarto Agudo da Ponte em Modelo de Rato Usando Estimulação Elétrica

Prenda um rato anestesiado em uma unidade estereotáxica.

Remova o pelo do couro cabeludo e higienize o local da incisão. Faça uma incisão na linha média e retraia a pele para expor o crânio.

Remova o tecido conjuntivo para evitar interferência com a broca. Identifique o bregma como ponto de referência para determinar as coordenadas da ponte, uma estrutura localizada no tronco encefálico.

Faça um furo no crânio.

Insira uma sonda através do orifício para alcançar a ponte.

Em seguida, conecte os eletrodos a um estimulador elétrico, conectando o ânodo à sonda para estimulação cerebral e o cátodo à orelha do rato para completar o circuito.

Forneça um pulso elétrico à ponte, induzindo danos teciduais localizados ou infarto.

Após a estimulação, deixe a sonda no lugar brevemente para estabilizar o efeito de estimulação.

Em seguida, remova lentamente a sonda e sele o local da cirurgia com cimento ósseo.

Suturar a incisão e retornar o rato à sua gaiola para recuperação e análise neurológica.

Pré-aqueça a almofada de aquecimento a 37 graus Celsius imediatamente antes da anestesia e prenda a broca de crânio ao suporte na estrutura estereotáxica. Confirme a falta de resposta ao reflexo pedal no primeiro rato anestesiado e monte o rato na estrutura estereotáxica na posição prona na almofada de aquecimento. Posicione as barras auriculares acima do canal auditivo para prender a cabeça, tomando cuidado para que o crânio seja mantido na horizontal para evitar qualquer inclinação da injeção.

Aplique pomada nos olhos do animal e use um micro-barbeador para remover os pelos do crânio. Use um marcador para desenhar uma linha de 3 centímetros ao longo da linha média do crânio da linha do canto lateral bilateral até 0,5 centímetros atrás da fontanela posterior e use um bisturi para fazer uma incisão na linha média ao longo da linha marcada. Use um cotonete para remover o sangue e coloque um pedaço de fita cirúrgica em cada lado do retalho de pele para expor o crânio.

Use um novo cotonete embebido em cloreto de sódio a 0,9% para remover suavemente qualquer tecido conjuntivo do crânio e localizar o bregma. Use uma caneta marcadora de ponta fina para indicar o ponto central do bregma como o ponto de origem. Coloque a broca a 6 milímetros ântero-posterior, 2 milímetros medial-lateral. Use a broca para realizar cuidadosamente uma craniotomia de 1 milímetro de diâmetro. Em seguida, substitua a broca por uma sonda de calibre 22 com uma bainha isolada, com a ponta colocada 2 milímetros acima da extremidade proximal da bainha.

Insira a bainha 7 milímetros no cérebro e avance a sonda ao longo da bainha até que o topo da sonda esteja 9 milímetros abaixo da superfície do cérebro. Conecte os eletrodos a um estimulador elétrico e conecte o ânodo à sonda. Em seguida, conecte o cátodo à orelha do rato. Em seguida, ligue o estimulador elétrico e defina a largura de pulso único para 4.050 milissegundos, a tensão para 50 volts e a corrente para 4 miliamperes.

Deixe a sonda na posição por cinco minutos após a estimulação, antes de remover o dispositivo do cérebro. Cubra a craniotomia com cimento ósseo e deixe o cimento secar antes de usar filamentos de sutura de poliamida 4-0 para fechar a ferida. Após três ou quatro pontos, amarre os nós cirúrgicos padrão 2-1-1. Em seguida, injete no rato 250 microlitros de penicilina por via intraperitoneal e monitore o rato a cada 15 minutos até ficar totalmente acordado antes de retornar o animal à sua gaiola.