Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:27 min. • July 8th, 2025
Pegue células-tronco neurais primárias e células progenitoras e neurônios, que têm sialoglicoproteínas marcadas por um repórter de ácido siálico.
Adicione paraformaldeído para fixar as células. Remova o excesso de paraformaldeído usando tampão.
Incube com uma mistura de reação contendo sondas químicas à base de biotina, um agente redutor e um catalisador à base de metal.
O agente redutor ativa o catalisador, facilitando a biotinilação das sialoglicoproteínas.
Remova a mistura de reação e lave com tampão. Adicione estreptavidina conjugada com fluoróforo para ligar as sialoglicoproteínas biotiniladas.
Remova a estreptavidina não ligada e lave com tampão. Adicione proteínas e um detergente não iônico para bloquear locais não específicos e permeabilizar as células.
Remova esta solução e incube com anticorpos primários direcionados a proteínas celulares específicas.
Remova os anticorpos não ligados.
Incube com anticorpos secundários marcados com fluoróforo e um corante fluorescente para ligar anticorpos primários ligados a proteínas e rotular os núcleos.
Remova as moléculas não ligadas. Lave com tampão.
Usando microscopia de fluorescência, obtenha imagens das células para visualizar as
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