Avaliação in vitro de β amilóide agregado no colapso do cone de crescimento neuronal

Comece com uma lâmina de cultura de vários poços contendo neurônios de um embrião de camundongo em um meio.

Os neurônios exibem cones de crescimento nas pontas de seus axônios em crescimento. Essas estruturas incluem projeções finas chamadas filopódios e extensões semelhantes a folhas chamadas lamelopódios, que consistem em filamentos de actina e microtúbulos, componentes do citoesqueleto.

Tratar os alvéolos de ensaio com proteína β amilóide agregada ou Aβ e os alvéolos de controlo com uma solução veículo.

Nos poços de teste, o Aβ agregado se liga aos receptores de membrana, iniciando a sinalização a jusante que fosforila as proteínas reguladoras do citoesqueleto.

As proteínas fosforiladas rompem os filamentos de actina e os microtúbulos, desestabilizando a integridade estrutural do cone de crescimento e causando seu colapso.

Incube com um fixador para preservar a estrutura celular, depois lave as células e monte-as para obter imagens.

Usando um microscópio, compare as estruturas celulares nos poços de teste e controle.

Uma ocorrência aumentada de colapso do cone de crescimento em neurônios tratados com Aβ indica o efeito tóxico dos agregados Aβ.

Comece este ensaio com pelo menos u