Detecção de micro-hemorragias cerebrais em modelo de rato

Micro-hemorragias cerebrais, ou CMHs, são sangramentos cerebrais neuroinflamatórios causados pela ruptura da barreira hematoencefálica, resultando no vazamento de glóbulos vermelhos, ou hemácias, para o tecido cerebral.

Para detectar CMHs, comece com tecido cerebral fixo de um rato com CMHs.

Mergulhe o tecido em sacarose para crioproteção.

Usando um criomicrótomo, corte o tecido e colete uma seção em uma lâmina de vidro.

Lave para remover o fixador residual.

Aplique o corante de hematoxilina ligado a um cátion metálico que interage com o DNA carregado negativamente, manchando o núcleo de roxo-avermelhado.

Siga com álcool-ácido para remover o excesso de corante e, em seguida, aplique um agente de azulamento alcalino para neutralizar o ambiente ácido e converter o corante em sua forma azul, aumentando o contraste.

Lave o tecido com álcool para melhorar a penetração da mancha e, em seguida, aplique eosina para manchar as hemácias de vermelho-laranja e os componentes do tecido de rosa.

Desidrate o tecido usando concentrações crescentes de álcool e limpe-o com xileno para visualização microscópica.

Capture imagens para detectar as hemácias vazadas de cor vermelho-laranja, confirmando CM