Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:25 min. • July 8th, 2025
Comece com uma cultura de neurônios aderentes tratada com agregados de alfa-sinucleína ou alfa-S, que são aglomerados de uma proteína mal dobrada.
Esses aglomerados se agregam para formar inclusões intracelulares.
Substitua a mídia por uma solução de fixação para preservar a integridade celular.
Remova a solução de fixação e lave com tampão.
Em seguida, adicione um surfactante para permeabilizar a membrana celular.
Remova o surfactante e lave com tampão.
Introduzir uma solução de bloqueio para evitar a ligação de anticorpos não específicos.
Agora, incube com anticorpos primários que se ligam especificamente a inclusões alfa-S e proteínas estruturais.
Lave com tampão para remover anticorpos não ligados.
Incubar com anticorpos secundários marcados com fluorescência.
Remova os anticorpos não ligados.
Adicione uma mancha fluorescente para rotular o núcleo.
Remova a mancha e lave com tampão.
Usando a mídia de montagem, monte a lamínula com neurônios em um slide.
Sob um microscópio fluorescente, observe inclusões alfa-S imunomarcadas dentro do neurônio.
Para realizar a imunofluorescência em uma capela química, fixar os neurônios com paraformaldeído a 2% em PBS e solução de sacarose a 5%
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