Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:56 min. • July 8th, 2025
Comece com um peixe-zebra adulto anestesiado.
Transfira o peixe para um suporte de alfinete de silicone e aplique uma camada de polímero sintético para lubrificar o olho.
Em seguida, posicione uma lente de laser na frente do olho para focar um feixe de mira de laser na retina.
Direcione o laser para o olho do peixe-zebra, induzindo lesões na retina.
O laser induz danos térmicos e a morte das células fotorreceptoras da retina, iniciando um processo degenerativo que progride ao longo de dias e se estende do epitélio pigmentado da retina até a camada plexiforme externa.
Em resposta, as células da glia de Muller (MG) sofrem gliose reativa, tornando-se hipertróficas e proliferativas.
Essas células então se diferenciam em progenitores de células-tronco.
As células progenitoras migram gradualmente para o local da lesão e, guiadas por pistas espaciais e temporais do microambiente, diferenciam-se em tipos de células retinianas maduras ao longo de vários dias, facilitando assim a regeneração da estrutura da retina.
Prepare uma solução estoque de anestésico dissolvendo 400 miligramas de pó de tricaína em 97,9 mililitros de água do tanque e 2,1 mililitros de TBS de um molar. Ajuste para pH 7,0 com um tris molar em pH 9. Para fazer a solução de trabalho, dilua a solução estoque de tricaína de 1 a 25 em água do tanque e transfira 50 mililitros para uma placa de Petri. Em seguida, coloque o peixe-zebra na solução anestésica por 2 a 5 minutos, até que fique imóvel e não responda a estímulos externos.
Transfira cada peixe manualmente para um suporte de alfinete de silicone feito sob medida para tratamento a laser.
A anestesia adequada é fundamental para o bem-estar do animal e o sucesso do procedimento. Portanto, a solução de tricaína recém-preparada é fundamental e o tempo fora da água não deve exceder 10 minutos.
Configure a potência de saída do laser de diodo de 532 nanômetros para 70 miliwatts, a duração do pulso para 100 milissegundos e o diâmetro da antena para 50 mícrons. Em seguida, aplique 1 a 2 gotas de hidroxipropilmetilcelulose a 2% no olho.
Ao aplicar metilcélula no olho, certifique-se de que a solução viscosa não entre nas brânquias.
Em seguida, use uma lente laser de fundo de olho de 2 milímetros para focar o feixe de mira do laser na retina. Coloque quatro pontos de laser ao redor do nervo óptico no olho esquerdo e use o olho direito, não tratado, como controle interno.