Estabelecendo um modelo de doença de Alzheimer no cérebro de peixe-zebra por meio de injeção de peptídeo amilóide

Encha um capilar de injeção de vidro com uma solução de peptídeos amilóides monoméricos sintéticos, que são peptídeos anormais com propriedades propensas à agregação.

Insira o capilar em um suporte de microinjeção.

Coloque simultaneamente um peixe-zebra em uma placa de Petri contendo uma solução anestésica.

Depois que o peixe estiver anestesiado, segure-o lateralmente com uma pinça para prender a cabeça.

Faça uma pequena incisão no crânio do peixe na junção das duas placas laterais para acessar o prosencéfalo rico em neurônios.

Agora, insira a agulha capilar através da incisão e injete a solução de peptídeo amilóide no prosencéfalo.

Transfira o peixe-zebra para um recipiente de recuperação com água circulante.

Dentro do prosencéfalo, os peptídeos amilóides se acumulam perto dos neurônios.

Esses peptídeos se dobram espontaneamente para formar folhas beta e se agregam ao redor dos neurônios para formar placas amilóides tóxicas.

Essas placas danificam os neurônios e prejudicam sua transmissão de sinal.

Isso estabelece um modelo de peixe-zebra da doença de Alzheimer, um distúrbio cerebral caracterizado por placas amilóides.

Use um extrator de agulha com parâmetros descritos no protocolo de texto, para preparar capilares de injeção de vidro. Ajuste a configuração de pressão na fonte de pressão para 25 PSI. Em seguida, no microinjetor, defina a pressão de retenção para 20 PSI, a pressão de ejeção para 10 PSI, o valor do período para 2.5 e o valor do gating para 100 milissegundos. Em seguida, carregue o capilar de vidro com a solução de injeção.

Em seguida, insira o capilar de vidro no suporte de microinjeção e ajuste o ângulo de injeção para 45 graus. Coloque um peixe em uma nova placa de Petri cheia de solução de anestesia. Depois de anestesiado, segure o peixe com uma pinça e oriente-o para a injeção. Usando a ponta de uma agulha de calibre 30, gere uma fenda no crânio sobre o tectum óptico onde as duas placas laterais se encontram. Use apenas a ponta da agulha e não penetre mais de 1 milímetro no crânio.

Em seguida, enquanto continua a segurar o peixe, insira a ponta do capilar de vidro através do local da incisão. Oriente a ponta do capilar de vidro em direção ao telencéfalo em um ângulo de 45 graus e, em seguida, injete 1 microlitro da solução. Coloque o peixe de volta em um recipiente de transporte até que ele se recupere. Em seguida, conecte ao recipiente a água de peixe que circula regularmente para garantir a qualidade ideal da água.