Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 3:01 min. • July 8th, 2025
Comece com uma câmara de gravação contendo uma fatia de cérebro espessa e segura imersa em líquido cefalorraquidiano artificial ou aCSF.
Essa fatia do cérebro inclui fluido intersticial e matriz extracelular, formando o espaço extracelular interconectado que envolve as células cerebrais.
Mergulhe o microeletrodo íon-seletivo de canal duplo e o microeletrodo de iontoforese no aCSF.
O microeletrodo íon-seletivo de canal duplo apresenta um canal de detecção para íons tetrametilamônio ou TMA e um canal de referência, enquanto o microeletrodo de iontoforese contém uma solução de TMA.
O eletrodo de iontoforese libera íons TMA, que se difundem em direção ao microeletrodo seletivo de íons.
O canal de detecção detecta esses íons TMA e gera um sinal elétrico. Registre isso como uma linha de base.
Insira os dois eletrodos na fatia do cérebro, mantendo-os ligeiramente separados.
À medida que os íons TMA se difundem pelo espaço extracelular, eles atingem o microeletrodo seletivo de íons.
Grave novamente o sinal e compare-o com a linha de base para analisar as propriedades do espaço extracelular, como a fração de volume e o grau de torção.
Coloque uma fatia de cérebro de 400 micrômetros de espessura na câmara de gravação, garantindo que ela esteja totalmente submersa no fluxo de ACSF. Em seguida, mova o microeletrodo de iontoforese e o ISM acima do campo de interesse na fatia do cérebro. Mergulhe ambos os eletrodos no ACSF em fluxo, mas acima da fatia. Em seguida, desloque a tensão para os canais de referência e sensores de íons para 0 milivolts. Aguarde até que a tensão em ambos os canais se estabilize.
No registrador gráfico, marque a tensão medida no canal de detecção de íons do ISM. Em seguida, coloque os microeletrodos ISM e iontoforese a 200 micrômetros de profundidade na fatia e a 120 micrômetros de distância um do outro. Calcule a diferença de tensão entre os sinais TMA medidos no fluxo ACSF e no cérebro e insira esse valor no campo de milivolts de volt de linha de base na caixa de eletrodos de medição da GUI Wanda.
No lado esquerdo da GUI, certifique-se de que todos os parâmetros experimentais sejam inseridos corretamente. Inicie a gravação clicando em Adquirir e permita que ela faça uma gravação completa. Depois de mover os dois microeletrodos para fora da fatia, use o registrador gráfico para determinar qualquer mudança entre a tensão medida agora e sua medição anterior.