Estabelecendo um modelo de rato com doença de Alzheimer por meio de uma injeção de peptídeo beta-amilóide

Comece com um rato imobilizado e anestesiado com o crânio exposto.

Localize o bregma, marque três pontos de referência e faça os furos com cuidado. Limpe a área.

Através de um dos orifícios, injete um fator de crescimento no núcleo talâmico anterodorsal, próximo ao hipocampo.

Prenda dois parafusos em dois dos orifícios, insira uma cânula guia no terceiro orifício e fixe-os com cimento dentário. Cubra a cânula guia com uma cânula falsa.

No dia seguinte, insira a cânula interna na cânula guia e conecte-a ao sistema de injeção.

Injete regularmente peptídeos beta-amilóides e tricloreto de alumínio no ventrículo lateral do cérebro para facilitar sua difusão no hipocampo.

Posteriormente, remova o sistema de implantação da cânula. Desinfete a área, preencha os orifícios com cimento ósseo e suture a incisão.

Com o tempo, os peptídeos beta-amilóide se agregam em placas tóxicas.

O fator de crescimento injetado e o tricloreto de alumínio também aumentam a formação de placas ao redor dos neurônios do hipocampo, que são cruciais para a memória.

Isso leva à morte neuronal, causando comprometimento da memória semelhante à doença de Alzheimer.

Em um rato anestesiado, comece cortando o pelo no vértice da cabeça com uma tesoura cirúrgica e desinfete com iodóforo.

Em seguida, faça uma incisão na pele da cabeça ao longo da calvária longitudinal mediana com bisturias cirúrgicas e tesouras.

Separe o tecido subcutâneo e a fáscia. Limpe a calvária do crânio com peróxido de hidrogênio a 0,3% e marque o bregma com um marcador. Em seguida, marque três pontos: o núcleo talâmico anterodorsal para injeção de RHTGF-β1 e fixação de um parafuso, o ventrículo lateral ou área do VE para injeção de Aβ25-35 e AICI3 e, por último, o segundo local de fixação do parafuso.

Delicadamente, faça três furos de 1 milímetro de diâmetro com uma broca óssea flexível nos três pontos marcados no crânio. Pare o sangramento e limpe a superfície do crânio repetidamente com algodão seco estéril.

Em seguida, insira uma agulha ligada à bomba de microinjeção no cérebro a 4,2 milímetros de profundidade e injete suavemente 1 microlitro RHTGF-β1 na área de anúncio. Mantenha a microinjeção dois minutos após a injeção e, em seguida, retire-a lentamente.

Fixe os dois parafusos no crânio, designados nos pontos marcados anteriormente com uma pequena chave de fenda. Após a colocação do parafuso, monte o sistema de implantação da cânula inserindo primeiro a cânula fictícia na cânula guia após a desinfecção com imersão em álcool a 75% por 24 horas. Em seguida, insira a cânula guia do tubo de aço inoxidável no cérebro a 4,6 milímetros na área do VE através do orifício do crânio, com a ajuda de um suporte de cânula no aparelho estereotáxico do rato.

Em seguida, misture o material da base da prótese com água da base da prótese, na proporção de 1,5 gramas por 1 mililitros. Coloque a pasta para cobrir a cânula guia pedestal de plástico e dois parafusos para imobilizar a cânula guia. Cubra toda a incisão da pele para evitar infecção da pele.

No dia seguinte, retire a cânula fictícia e insira a cânula interna na cânula guia. Aperte o parafuso de fixação para imobilizar a cânula interna.

Defina o tubo de polietileno que liga a bomba de microinjeção à cânula interna e regule a velocidade de injeção para 1 microlitro por minuto. Microinjete o Aβ25-35 no VE. Aguarde cinco minutos após terminar a injeção e retire suavemente a cânula interna. Em seguida, insira a cânula fictícia novamente na cânula guia.

No dia 15, pós-operatório, desmonte o sistema de implantação da cânula removendo o material da base da prótese sólida com tesoura cirúrgica e pinça e desinfetando a ferida com iodóforo.

Por fim, preencha o orifício do crânio com cimento ósseo e suture a pele com um método simples de sutura interrompida.