Geração de um Modelo Murino com Infecção do Sistema Nervoso Central

Comece com duas seringas cheias de diferentes volumes de mídia contendo os vírus direcionados para a infecção do sistema nervoso central (SNC).

Mantenha o filhote de rato em uma posição de bruços. Desinfete a cabeça e injete o menor volume da solução do vírus por via intracerebral através da região lambda.

Isso permite que os vírus contornem a barreira hematoencefálica e atinjam diretamente o tecido cerebral.

Em seguida, segure o filhote de rato em decúbito dorsal. Desinfete e injete o maior volume da solução do vírus no abdômen.

Isso facilita a disseminação sistêmica do vírus pelos vasos sanguíneos, infectando outras partes do SNC.

Os vírus injetados entram nas células neuronais e usam a maquinaria do hospedeiro para se replicar, levando à morte celular.

Os vírus também acionam o sistema imunológico, causando inflamação do SNC e estabelecendo um modelo de infecção do SNC.

Antes de iniciar o procedimento de infecção, dilua o estoque não adaptado do vírus da dengue 2 para 1 vezes 10 elevado à quinta unidade formadora de placa por 40 microlitros de concentração média de RPMI 1640. Em seguida, carregue uma seringa de 10,3 mililitros equipada com uma agulha de calibre 30 com 10 microlitros de vírus diluído e uma seringa de 10,3 mililitros equipada com uma agulha de calibre 30 com 30 microlitros de vírus por animal.

Para a administração intracerebral do vírus, pressione o oráculo entre o polegar e o indicador para conter suavemente um camundongo lactante de sete dias em decúbito ventral e injete o volume de 10 microlitros do vírus diluído na área lambda na interseção da sutura sagital e lambdoide. Após a injeção intracerebral, use o polegar e o indicador para segurar o camundongo em decúbito dorsal e, suavemente, intraperitonealmente, injete o volume de 30 microlitros do vírus diluído no abdômen murino.