JoVE Encyclopedia of Experiments
Neurociência
0 vistas • 2:27 min • July 8th, 2025
Comece injetando subcutaneamente uma emulsão contendo um peptídeo neuronal e um adjuvante bacteriano morto pelo calor em um camundongo anestesiado.
No tecido subcutâneo, o adjuvante atrai células apresentadoras de antígenos, ou APCs, que processam e apresentam os peptídeos neuronais nos principais complexos de histocompatibilidade.
As APCs ativadas atingem os linfonodos e interagem com células T virgens, induzindo sua diferenciação em células T autorreativas.
Essas células T circulam e atingem a barreira hematoencefálica ou BBB.
Em seguida, injete exotoxinas derivadas de bactérias por via intraperitoneal.
As exotoxinas atingem a BHE, aumentando sua permeabilidade e permitindo a infiltração de células T no sistema nervoso central (SNC).
No SNC, as células T interagem com as APCs residentes que apresentam o peptídeo neuronal, promovendo a liberação de citocinas que induzem maior infiltração de células imunes.
As células imunes liberam citocinas pró-inflamatórias, causando danos à mielina.
Além disso, as células B interagem com as células T e secretam autoanticorpos que danificam ainda mais a mielina, estabelecendo encefalomielite autoimune experimental (EAE).
Neste procedimento, dissolva o PTX a 2 microgramas por mililitro em 1x PBS e misture bem. Em seguida, injete 100 microlitros de PLP / CFA nos camundongos por via subcutânea, duas vezes na base da cauda durante a anestesia curta com isoflurano. Não injete na nuca, pois quaisquer reações imunológicas na pele da parte superior das costas ou pescoço perturbarão a imagem da cabeça e da medula espinhal.
Uma a duas horas após a imunização, injete 100 microlitros de PTX nos camundongos por via intraperitoneal.
Em seguida, 24 horas após a imunização, injete novamente nos camundongos 100 microlitros de PTX. Para os camundongos de controle, injete 100 microlitros de CFA sem PLP duas vezes, na base da cauda.