Coloração Imunofluorescente de Populações Neuronais no Trato Gastrointestinal Murino Embrionário
Enciclopédia de Experimentos da JoVE
Neurociência
0 visualizações • 2:58 min. • July 8th, 2025
Pegue um trato gastrointestinal de camundongo embrionário transgênico fixo no estágio de desenvolvimento desejado.
O sistema nervoso entérico do trato gastrointestinal inclui neurônios entéricos e colinérgicos que expressam colina acetiltransferase.
Esses neurônios colinérgicos também expressam uma proteína fluorescente impulsionada pelo promotor da colina acetiltransferase.
Incube o trato com um detergente não iônico e proteínas para permeabilizar as células e evitar a ligação inespecífica de anticorpos.
Substitua por anticorpos primários. Incube para que os anticorpos se liguem às suas proteínas-alvo nos neurônios, respectivamente.
Remova os anticorpos não ligados e lave com tampão.
Incubar com anticorpos secundários conjugados com fluoróforo para ligar especificamente os anticorpos primários ligados às proteínas-alvo.
Remova o excesso de anticorpos e lave com tampão.
Mergulhe o trato rotulado em meios de montagem contendo um corante nuclear para corar os núcleos. Agora, monte uma lamínula.
Usando microscopia confocal, visualize e analise a distribuição de neurônios colinérgicos no trato gastrointestinal.
Coloque os tratos gastrointestinais em um tubo de 0,2 mililitro contendo so
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