Indução de neuroinflamação em camundongos por injeção de fibrilas de alfa-sinucleína

Posicione um camundongo transgênico em posição dorsal. O camundongo expressa uma forma mutada da proteína alfa-sinucleína, que é propensa à agregação.

Tome uma suspensão de fibrilas de alfa-sinucleína, agregados de proteína alfa-sinucleína mal dobrada.

Injete as fibrilas na cavidade peritoneal para permitir sua distribuição sistêmica.

Uma vez na corrente sanguínea, as fibrilas atingem o sistema nervoso central e se ligam às células endoteliais da barreira hematoencefálica.

As fibrilas são transportadas através de vesículas através das células e entram no tecido nervoso. Eles então invadem os neurônios por meio da endocitose e promovem a agregação das proteínas alfa-sinucleína mutadas.

Esses agregados são liberados por exocitose e se espalham para neurônios, micróglias e astrócitos vizinhos.

O reconhecimento dos agregados faz com que a microglia libere espécies reativas de oxigênio, que danificam o tecido, e citocinas, que recrutam células imunes adicionais. Isso resulta em neuroinflamação que leva à morte das células neurais.

Permita que o camundongo se recupere para avaliar a neuroinflamação mediada por alfa-sinucleína.

Para injeções intraperitoneais, narcotize brevemente os animais em uma câmara de anestesia com isoflurano. Novamente, aperte o dedo do pé do animal e confirme se ele não retira o membro posterior para garantir a anestesia adequada. Encha uma seringa hipodérmica descartável de calibre 27 com 50 microlitros de fibrilas de alfa-sinucleína sonicadas ou PBS.

Segure o animal em posição dorsal, com a cabeça voltada para longe do investigador e para baixo a aproximadamente 45 graus. Injete diretamente no peritônio do camundongo sem penetrar no intestino delgado ou ceco localizado atrás da parede abdominal. Monitore os animais até que eles se recuperem da anestesia.